专题一兽药的毒理学试验和安全性评价.pptVIP

组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102四个标准株。每次试验要求4--5个剂量组，每个剂量做三个平行平皿。高剂量以不抑菌为原则。液态受试物：0.05-50ul/平皿固态受试物：0.1-1000ug/平皿，最高剂量可达5000ug/平皿。选定后剂量的药物应配制成适当浓度体积：100ul或200ul/皿。菌种剂量分组4.溶剂水5.对照物每次检测均需要阳性对照：已知的阳性药物阴性对照：溶剂加S9混合液时要同时作不加S9混合液的对照平皿6.S9混合液如果受试物可能是经动物体酶系统活化代谢后才具有致突变作用，则试验过程需要在培养基上同时加入哺乳动物的肝微粒体（S9混合液），使受试物被活化而呈现致突变作用。S9制备*制成匀浆。低温离心后分装，保存于液氮或4–80℃冰箱。5选体重200g左右成年雄性大鼠，经诱导剂诱1导后宰杀（处死前12小时禁食）。在低温条件下，2无菌操作取出肝脏，用KCI液淋洗后置匀浆器中37.试验步骤TA97aTA98TA100TA10237℃水浴振荡培养活菌数不得少于1～2x109/ml增菌培养液增菌培养液增菌培养液增菌培养液*受检物+菌液+S9混合液或磷酸盐缓ml）（0.1ml）（0.5ml）37℃水浴振荡培养20imns加入45℃顶层培养基2ml混匀37℃培养48h无菌小试管含底层培养基的平皿量反应关系和重现性，判为诱变阳性。受试组的菌落数大于2倍自发回变数，并有剂原理：骨髓细胞染色体经诱变物作用，发生突变后出现断裂，并有部分断片在有丝分裂后期不移向两极，在有丝分裂的末期不进入分裂的细胞核中，因而存留于细胞浆中，形成一个或几个圆形至杏仁状的结构，并存留一定时间。由于这种圆形结构比普通细胞核小，故称微核（micronucleus）。诱变物原理：微核直径相当于红细胞直径的1/20～1/5。嗜多染红细胞给药方式03给药途径：与临床用药途径相同。内服时需灌胃。给药剂量：以LD50为依据，设三个剂量组。高剂量组LD50的0.8-0.5；低剂量组LD50并设阴性对照和阳性对照组，阳性对照物可选用已知的能诱发微核阳性的诱变剂。受试物的处理02ml/10g体重的给药体积配制成适当的浓度。动物01成年健康小鼠（品系），随机分为受试组和对照组。10只/组，雌雄各半。一次给药：24，48，72小时取样制片。二次给药：第二次给药后的6，24小时取样制片。处死小鼠，将股骨骨髓洗入离心管，离心，常规涂片。姬姆萨染色，镜检。计数：1000个嗜多染红细胞（PCE）/片求出：嗜多染红细胞/正染红细胞（NCE）必要时，丫啶橙染色，荧光显微镜分析计数。试验操作镜检结果评价*将数据列表，分别列出嗜多染红细胞数，微核数及01010203PCE/NCE之比。所得结果用t检验进行数据分析，经重复试验P0.01并有剂量反应关系时，判为阳性。0203目的将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠的死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。实验动物*12小鼠健康无伤，体重17～20g。做过本实验的小鼠不能重复使用。12皮下注射：可见注射部位皮下出现泡状隆起。长至30秒。间一般为4～5秒，规定缓慢注射的药品可延静脉注射：尾静脉注入供试品溶液，注射时鼠分别给予供试品溶液0.5ml。取5只小鼠，按药物的给药途径，每只小EDCBAF除另有规定外，5只小鼠在给药后48小时内不得死亡。如有死亡，另取体重17～20g小鼠10只复测，全部小鼠在48小时内不得有死亡，否则，判为不合格。01020304