生物技术育种.ppt

关于生物技术育种本章要点花药培养和花粉培养的原理和方法离体条件下花粉的发育途径原生质体培养的原理和方法体细胞杂交的原理和方法人工种子的制作体细胞无性系变异的诱导和筛选基因工程的原理和方法分子标记辅助育种的原理和方法第2页,共29页，星期六，2024年，5月第一节园林植物细胞工程育种植物细胞工程（plantcellengineering）是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。理论基础：植物细胞的全能性（celltotipotency）。第3页,共29页，星期六，2024年，5月一、花药和花粉培养1.花药和花粉培养的概念概念：指在培养基上接种植物的花药/花粉，使小孢子改变发育途径，不形成配子，而是像体细胞一样进行分裂、分化，最终发育成完整植株的培养方法。离体条件下花粉分裂增殖方式的类型：营养细胞发育途径。生殖细胞发育途径营养细胞和生殖细胞并进发育途径花粉均等分裂途径第4页,共29页，星期六，2024年，5月2.花粉和花药培养的方法材料的选择培养基预处理接种花药/花粉培养的方法液体浅层培养平板培养看护培养微室悬滴培养⑥试管苗移栽⑦染色体加倍第5页,共29页，星期六，2024年，5月3.花粉植株的鉴定①植株形态学鉴定法。单倍体植株瘦弱、短小、叶片窄小、花小柱头长、花粉粒小、不结实。②细胞形态学鉴定法。单倍体植株的细胞及细胞核、叶片和气孔、叶绿体、叶片保卫细胞都小于二倍体的细胞，单位面积上的气孔数及保卫细胞中叶绿体的数目也较少。③扫描细胞光度仪鉴定（流式细胞仪）。测定叶片单个细胞中DNA的含量确定细胞的倍性。④染色体直接计数法。采用染色体压片法，在显微镜下检查根尖、茎尖分生组织的染色体数目。⑤分子标记鉴定。采用生化标记（如同工酶标记）和分子标记（如RFLP、RAPD、AFLP等）进行检测。第6页,共29页，星期六，2024年，5月4.影响花药/花粉培养的因素植物材料花粉发育时期培养基培养条件第7页,共29页，星期六，2024年，5月5.花药/花粉培养与育种母本H1混收得H2花粉植株染色体加倍得H1父本×F1H3株系比较H4品比、区试、生产试验繁殖推广第8页,共29页，星期六，2024年，5月二、原生质体培养和体细胞杂交1.原生质体培养（1）材料选择（2）原生质体的分离以适当的密度重悬，用于培养取少量计数重悬于培养基细胞碎片原生质体重悬、离心离心清洗液清洗吸掉酶液灭菌叶片保温第9页,共29页，星期六，2024年，5月（3）原生质体的纯化离心沉淀法。漂浮法。界面法。（4）原生质体的活力鉴定形态学鉴别染色法鉴别（5）原生质体的培养液体浅层培养固体薄层培养双层培养法（6）原生质体的发育和植株再生第10页,共29页，星期六，2024年，5月2、体细胞杂交（1）原生质体融合的方法化学融合法是采用化学试剂诱导两种植物的原生质体发生融合形成杂种细胞的方法，常用的方法有高钙高pH法、聚乙二醇（PEG）法等。物理融合法主要是采用离心、振动、电刺激等措施促进原生质体融合。电融合是最常用的一种物理诱导方法。（2）原生质体融合的方式对称融合非对称融合第11页,共29页，星期六，2024年，5月（3）杂种细胞的鉴定1）互补选择法白化互补选择法营养代谢互补选择法。抗性互补选择法。2）机械法3）双荧光标记选择法第12页,共29页，星期六，2024年，5月（4）杂种植株的鉴定1）形态学鉴定2）细胞学观察3）生化鉴定4）分子标记鉴定第13页,共29页，星期六，2024年，5月四、体细胞无性系变异1.概念：植物的体细胞在离体培养条件下所产生的细胞系或植株，统称为体细胞无性系。2.遗传基础：（1）染色体数目变异（2）染色体结构变异（3）基因突变3体细胞无性系突变体的筛选：一步筛选法是将培养物接种在含有致死剂量的培养基上，表现出生长的培养物再转移到含有抑制剂的新鲜培养基上。多步筛选法是首先使用半致死剂量对细胞进行筛选，每次继代将上代能生长的细胞系继代到筛选剂浓度提高的新鲜培养基上。第14页,共29页，星期六，2024年，5月4.体细胞无性系变异育种价值：①可以在保持品种原有优良种性不变的情况下改进个别观赏性状；②在短期内筛选出所需的性状，避免基因重组带来的麻烦；③结合物理或化学诱变，可以大大提高育种效率；④异后代遗传稳定快，育种年限短；