生物化学课件-23.DNA复制与损伤修复1.ppt

复制的特点:

1.复制机制的多样性;

方式多样:线状、环状

D-环复制，θ型复制，滚环复制

2.复制的完整性；

3.DNA复制与细胞周期的协调性（一致）

4.DNA复制的真实性

DNA复制错误率10-9—10-10（生物进化、多

样性的来源）DNA复制模型DNA半保留复制实验

DNA复制反应的共同特点

1.半保留复制；

以母链为模板，合成新的互补链

2.半不连续复制；

3.有特定的复制起点；

复制子（复制单元）

4.需要引物；（3’-OH）

5.复制真实性；

6.复制叉的双向移动，DNA合成的单向延伸

5’→3’；

8.复制受控制

DNA聚合酶的活性5′至3′的聚合活性5′→3′方向核酸外切酶活性5′→3′外切酶活性3′→5′外切酶活性核酸外切酶活性和即时校读DNA-polⅠ，Ⅱ的3′→5′外切酶活性复制的保真性和碱基选择polⅢ的ε亚基先形成氢键，再生成磷酸二酯键依赖三种机理1遵守严格的碱基互补配对规律2聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能3复制中出错时有即时校读功能5′至3′的聚合活性（5′→3′）

核酸外切酶活性3′→5′外切酶活性5′→3′外切酶活性(一)原核生物DAN聚合酶（DNApolymerase)

polⅠ，分子量：103000,一条多肽链，不是复制主要的酶。用枯草杆菌蛋白酶可切成2个片段其中：小片段5′→3′核酸外切酶活性大片段（Klenow片段）聚合活性、3′→5′外切活性常用的工具酶，大肠杆菌PolIII全酶的推测结构(V型)?亚基与模板的结合?亚基形成一个围绕DNA的环状钳（二）真核生物（DNA-pol）：α与随从链的合成有关β核酸外切酶活性与修复有关γ存在于线粒体δ与前导链的合成有关ε与校读、修复和填补缺口有关DNA的半不连续复制

由于DNA的两条链为反向平行，以复制叉移动的方向为基准，一条链为3’→5’，其新合成的DNA链沿5’→3’连续进行——前导链

另一条链为5’→3’，新生的DNA链先合成短的冈崎片段，不连续合成——滞后链，再由DNA连接酶连接成完整的DNA链。

这种前导链的连续复制和滞后链的不连续复制称为半不连续复制。RNA引物通过PolI5’?3’外切酶活性除去DNA聚合酶I的作用大肠杆菌复制起点的核苷酸序列特征DNA复制叉上的蛋白质复制叉的三维结构真核生物的端粒和端粒酶端粒(telomere)是真核生物染色体线性DNA分子末端的结构富含GC的重复序列人：(TTAGGG)n端粒酶(telomerase)RNA--蛋白质复合物既有模板，又有逆转录酶以自身的RNA为模板延长DNA单链，然后反折为双链,爬行模式端粒酶与生物体的衰老、肿瘤的发生有关。DNA损伤的化学及物理因素五、逆转录现象和逆转录酶RNA病毒逆转录酶(reversetranscriptase,RT)逆转录活性RNaseH活性DNA聚合酶活性GATCCTAGCH3AGATCCTAGGATCCTAGGATCCTAGGCGAGC1.错配修复机制GATCExcisionrepair(baseornucleotide)ATGCUGCATTGATAGTACGGCGTAACTATCthyminedimerATAGTACGGCGTAACTATCATGCCGCATTGATAGTACGGCGTAACTATCATGCCGCATTGATAGTACGGCGTAACTATCexcinucleaseDNApolymerasebDNAligase(~30nucleotides)ATGCUGCATTGATACGGCGTAACTATGCGCATTGATACGGCGTAACTATGCATTGATACGGCGTAACTdeaminationATGCCGCATTGATACGGCGTAACTATGCCGCATTGATACGGCGTAACTuracilDNAglycosylaserepairnuclease