全自动生化分析仪的常用检测方法.pptVIP

吸光系数法吸光系数法又称绝对法，是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式A＝Kbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长处的吸光系数或,并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A，则其浓度为：或内容概述单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。基本原理终点法检测方法固定时间法连续监测法终点法终点法——通过检测终点吸光度的改变大小来求出被测物含量。何为终点？如何判断？通常在反应终点附近连续选择两个吸光度值，求其平均值，根据两点的差值来判断反应终点。终点法终点时间的确认：根据时间-吸光度曲线如:Trinder反应测尿酸，反应曲线上3-5分钟时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。根据被测物反应终点，结合干扰物的反应情况来确定如:溴甲酚绿法测血清白蛋白终点法：一点终点法二点终点法免疫比浊法双波长法分类一点终点法通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。一点终点法的设置：以R和S混合之前的空气空白、水空白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线，对于反应速度快的多用。如：GLUTGCH等**一点终点法反应曲线01Al02T（时间）03A04S+R05(吸光度）计算公式：C=(Am-Ab)*KAm----终点读数点的吸光度Ab----试剂空白吸光度K----校正系数二点终点法第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反应达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。1第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。2**两点终点AnTAR2AmS+R1(吸光度）（时间）Ax=样本空白An-k0Am（体积校正因子）k0=Sv+RlSv+R1+R2两点终点法计算公式：C=(An-K0*Am)*KK0---体积校正因子K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2)免疫比浊法通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的方法：散射比浊：特定蛋白分析仪透射比浊：自动生化分析仪通常作两点终点法分析，多采用多点校准。应用：用Ab测定Ag（主要为微量蛋白：IG、C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab过量，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加而递增，光散/透射射强度与抗原量成正比。免疫比浊法缺点：抗体用量大达平衡时间长优点：方法简便结果准确可用于自动化仪器检测双波长法消除样品中对测定有干扰的物质的影响；在试样中含有两个组分a和b时，若要测定组分b,组分a有干扰，应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸收波长λ1作为测量波长，然后用作图的方法选择参比波长λ2，使组分a在这两个波长处的吸光度相等。双波长法试样溶液在λ2和λ1两个波长处的吸光度之差，只与待测组分的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关干扰物质脂血：吸收光谱300～600nm呈下降趋势Hb：350nm、400nm、540nm、580nm吸收峰胆红素：300～500nm有吸收峰可见它们的吸收峰都较宽，且同测定波长有重叠现象。双波长法主波长的选择反应体系中待测组分吸收峰对应的波长，尽量避开或减少来自试剂空白和样本空白对测定组分的干扰，提高特异性和灵敏度。双波长法辅助波长的选择：根据测定波长选择辅助波长，要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度，待测物吸光度差异很大。如:钼酸铵法测P3＋用340nm，而Hb在340及380nm均有较高吸收峰，选380nm作为辅助波长。生化分析仪的常用检测方法董苹2010-8内容一概述二基本原理