免疫凝集反应及临床应用.ppt

***免疫凝集反应及临床应用刘静凝集反应定义细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。反应阶段：抗原抗体的特异性结合阶段出现肉眼可见的凝集现象凝集反应反应特点：IgM的作用比IgG大数百倍IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体可见反应形成电解质：稀释液或缓冲液（8.5g/LNaCl）010102030405pH：pH6～pH9（pH3为细菌抗原的等电点）温度：15℃～40℃，37℃最适（4℃特例）反应时间：不同反应时间不同外力：震荡或搅拌02030405环境因素分类：直接与间接凝集反应颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。01包括：02玻片凝集试验03试管凝集试验04直接凝集反应05directagglutination061定性2已知抗体检测抗原3简便、快速4菌种的诊断或分型5ABO血型的鉴定玻片凝集试验：2已知抗原检测抗体3易引起抗原的非特异性凝集1半定量4肥达试验试管凝集试验：0.50.50.50.50.5弃掉0.5试管凝集试验原理结果1234567菌液+很小的凝集颗粒混浊-无凝集现象与对照相同++小、部分凝集块中等混浊+++大多凝集管底轻度混浊++++大的凝集块清亮凝集程度沉淀上清试管凝集试验结果判断管底沉淀凝集程度最高稀释比例待测血清的滴度试管凝集试验结果判断间接凝集反应indirectagglutination将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象目前应用最广的是人的O型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红细胞的表面有大量的（约1000个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好。02良好载体有如下几点基本要求：①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；②大小均匀；③比重与介质相似，短时间内不能沉淀；④无化学或血清学活性；⑤吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。01RBC、白陶土、活性炭、某些细菌、聚苯乙烯胶乳颗粒载体种类正向间接凝集试验01反向间接凝集试验02间接凝集抑制试验03协同凝集试验04间接凝集反应正向间接凝集反应用抗原致敏载体--检测抗体用抗体致敏载体----检测抗原反向间接凝集反应间接凝集抑制反应用抗原致敏载体--检测抗原有凝集颗粒为阴性STEP3STEP2STEP1反向间接凝集试验，载体为金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白，和IgG的Fc段结合，使Fab段暴露在菌体表面，Fab段仍然保持正常的抗体活性。利用这种特性可以将特异性IgG结合在菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性抗原。协同凝集反应原理图IgGSPASPA-IgG待测抗原SPA-IgG-待测抗原凝集颗粒混合加入间接血凝试验胶乳凝集试验明胶凝集试验01按载体分类间接凝集试验02以红细胞为载体的间接凝集试验。将已知抗原(或抗体）致敏红细胞，与相应抗体（或抗原）特异结合，出现红细胞凝集现象。1间接血凝试验2红细胞抗原致敏致敏红细胞红细胞凝集待测抗体间接血凝试验原理：红细胞沉积于孔底血凝试验强度+：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集1++：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散2+++：红细胞形成片层凝集，面积略多于++3++++：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状4与一般间接血凝试验不同之处为反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞主要试剂材料为抗红细胞单克隆抗体，能与红细胞结合，但不引起凝集反应这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可用于检测标本中的抗原如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体反应中的标本为受检者的全血HIV抗体、HBV抗原检测自身红细胞凝集试验胶乳凝集试验以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定，均一性好但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细胞因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度不及血凝试验***