牛奶中酪蛋白的提取及含量测定ppt课件.pptxVIP

牛奶中活性物质的分析;实验内容;（1）牛奶中水分含量的测定;一重量法;二材料与仪器;三操作步骤;

三、适用范围与特点

;四材料、试剂与器材

材料：全脂牛奶

试剂：乙醚

器材：索氏提取器、干燥箱、电子分析天平;;五、操作方法

1抽提筒的准备

2抽提

将测定完水分带有干物质的滤纸折成小包放入抽提筒，再放入索氏抽提器内，连接已干燥至恒重（m5）的脂肪接受瓶，由冷凝管上端加入无水乙醚，加量为接受瓶的2／3体积，于60℃水浴上加热，使乙醚不断的回流提取，一般视含油量高低提取6—12小时，至抽提完全为止（用滤纸试）。

;3称重;六结果处理;七、注意事项

乙醚为易燃有机溶剂，实验室应保持通风并禁止任何明火。

抽提用的乙醚或石油醚要求无水、无醇、无过氧化物，挥发残渣含量低。因水和醇可导致水溶性物质溶解，如水溶性盐类、糖类等，使得测定结果偏高，被测样品也要事先烘干。过氧化物会导致脂肪氧化，在烘干时也有引起爆炸的危险。

装样品的滤纸筒一定要严密，不能往外漏样品，也但不要包得太紧影响溶剂渗透。放入滤纸筒时高度不要超过回流弯管，否则超过弯管的样品中的脂肪不能提尽，造成误差。;八、思考题

(1)?本实验制备得到的是粗脂肪,若要制备单一组分的脂类成分,可用什么方法进一步处理？

(2)?本实验样品制备时烘干为什么要避免过热;（3）酪蛋白的提取

一、目的要求

掌握一种提取酪蛋白的方法

掌握一种检测牛乳质量的方法

;二实验原理;三仪器、原料和试剂;四实验步骤;五思考题;六离心机的使用及注意事项;（4）蛋白质浓度的测定—考马斯亮蓝染色法;考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，最大吸收峰改变为595nm,考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度（比Lowry法灵敏4倍）在一定范围内，蛋白质和染料考马斯亮蓝结合符合比尔定律，因此可以通过测定染料在595nm处光吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。;CoomassieDye-Based蛋白质定量;三实验试剂与器材;四、操作方法

1.标准曲线制作

取14支试管，分两组按下表平行操作。

试管编号0123456

标准蛋白溶液(mL)00.10.20.30.40.50.6

0.9%NaCl溶液（mL）1.00.90.80.70.60.50.4

考马斯亮蓝试剂(mL)4444444

蛋白质浓度(?g/mL)0102030405060

A595nm

摇匀，1h内以0号试管为空白对照，在595nm处比色OD595nm

以OD595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。

;2.酪蛋白浓度的测定

称取一定量的酪蛋白，用0.9%NaCl溶液溶解定容至一定体积（使其测定值在标准曲线的直线范围内）。测定方法同上，根据所测定的OD595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(?g/mL)。

;五注意事项;六722型分光光度计使用方法;3．测定

（１）??吸光度Ａ的测量。将要测Ａ的试样溶液推入光路，显示值即为待测样品的吸光度值Ａ。

（２）??浓度c的测量。将要测c试样溶液推入光路，即可读出待测样品的浓度值c。

4．结束

测量完毕，关闭电源，将各调节旋钮恢复至初始位置。取出吸收池洗净，晾干，存于专用盒内。

注意事项：

（1）??仪器接地要良好，否则显示数字不稳定。

（2）??如果大幅度改变测试波长时，在调整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“00.0”和“100”即可工作。

（3）??仪器左侧下角有一只干燥剂筒，应保持其干燥，发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。

（4）??当仪器停止工作时，关掉电源，电源开关需同时切断，并罩好仪器;七思考题