2025年高考生物二轮复习大单元8生物技术与工程层级三核心素养突破练.pptxVIP

层级三核心素养突破练高考总复习2025

121.(2024·江苏盐城模拟)(11分)为研究编码铁运输相关蛋白的基因A(约963bp)在拟南芥缺铁胁迫响应中的作用,需要构建超量表达A的拟南芥转基因株系。质粒的结构如图2所示。回答下列问题。

12逆转录酶(1)图1中,过程①指的是从拟南芥中提取RNA,经催化,合成cDNA;过程②指的是以cDNA为模板,通过PCR扩增目的基因,需要在引物的端,加入限制酶、的识别序列。?(2)构建表达载体时,将PCR产物与质粒分别双酶切后,先进行琼脂糖凝胶电泳,将目标片段与无关片段分离,从琼脂糖凝胶中只回收目标片段,再用DNA连接酶进行连接,以避免。?(3)将转化后得到的单克隆农杆菌进行PCR鉴定,结果如图3所示,根据此结果,科研人员欲选择1、2号菌进行测序,原因是_______________________。?5BamHⅠSalⅠ目标片段与无关片段重新连接1、2号菌的PCR产物长度与基因A基本相符,但无法确定PCR产物的碱基序列是否与基因A相同

12花序(4)将拟南芥的直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间,然后培养植株,将得到的种子接种在含有(填抗生素名称)的固体培养基上培养,以筛选出成功导入目的基因的阳性植株。?(5)提取转基因及野生型植株的蛋白质进行电泳检测,结果如图4所示。若其中号为转基因植株的蛋白质电泳结果,则说明成功构建超量表达A的拟南芥转基因株系。?潮霉素①

12解析(1)图1中,过程①是以RNA为模板,经逆转录酶催化,合成cDNA的过程;子链沿着引物3端延伸形成目的基因,限制酶的识别序列应该加在引物的5端,即在目的基因的外侧。KpnⅠ会破坏目的基因,HindⅢ会破坏卡那霉素抗性基因,因此选择BamHⅠ、SalⅠ两种限制酶。(2)将PCR产物与质粒分别双酶切,使目的基因及剪切后的质粒两端黏性末端不同,这样可避免目的基因自连以及质粒自连;只回收目标片段,再用DNA连接酶进行连接,以避免目标片段与无关片段重新连接。(3)图3的结果显示1、2号菌含与目的基因长度相同的DNA片段,但1、2号菌是不是目的基因,还要进行碱基序列的检测。

12(4)将拟南芥的花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间,可以形成农杆菌转化的拟南芥种子。T-DNA上的标记基因是潮霉素抗性基因,因此需将得到的种子接种在含有潮霉素的固体培养基上培养,以筛选出成功导入目的基因的阳性植株。(5)图4的①号目的蛋白条带宽,说明其目的基因表达量高,若①号为转基因植株的蛋白质电泳结果,②号为野生型植株的蛋白质电泳结果,则说明成功构建了超量表达A的拟南芥转基因株系。

122.(2024·天津二模)(13分)磷脂酸(PA)是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中PA的动态变化,研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白(PABD)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合,构建有效监测细胞PA变化的荧光探针,并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如图所示,请回答下列问题。

12注:bar为草胺膦抗性基因;Kanr为卡那霉素抗性基因。

12(1)无缝克隆时,T5核酸外切酶(从核苷酸链的外侧向内侧剪切核苷酸)沿(填“5→3”或“3→5”)的方向水解DNA,其目的是形成。T5核酸外切酶催化的最适温度为37℃,而过程①选择的温度为50℃,目的是,防止过度水解DNA。?(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”的原因是,过程③所需的酶有。?(3)与传统的酶切再连法相比,无缝克隆技术构建重组质粒的优点有(多选)。?A.不受限制酶酶切位点的限制B.不需要使用PCR技术扩增目的基因C.不会出现目的基因的反向连接和自身环化5→3黏性末端降低酶活性过程①形成的黏性末端大于互补配对的区段(同源序列)DNA聚合酶和DNA连接酶AC

12③(4)PCR扩增GFP基因时需依据的部分核苷酸序列设计引物R2。已知引物F1的碱基序列是5-TCCGGACTCAGATCTCGAGC-