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DB21/TXX—XXXX

鹿冷冻精液生产技术规程

1范围

本文件规定了梅花鹿、马鹿冷冻精液生产的采精前准备、采精、精液品质评定、精液稀释、精液分装与平衡、精液冷冻、冻精活力检查、冻精包装与贮存和记录的要求。

本文件适用于梅花鹿、马鹿的冷冻精液生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

NY1181输精细管

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4采精前准备

4.1采精场所

应保持安静、宽敞、明亮，地面清洁卫生。

4.2采精员

应剪短指甲，更换好工作服和鞋帽，戴上工作手套。

4.3种公鹿

采精前24h应停止饮水和饲喂。

4.4器具和药品

一次性长臂手套、脱脂纱布、剪子、集精杯、保温箱或水浴锅、电刺激采精器、生理盐水、麻醉药、苏醒药、凡士林等。

4.5稀释液

推荐使用无动物源成分稀释液，按照使用说明的要求配制，配制好的稀释液应放在32℃恒温水浴锅中备用。

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4.6细管

剂型为0.25mL，其质量应符合NY1181的规定。

4.7标识

4.7.1细管

标记应符合附录B的规定。

4.7.2包装袋

包装袋上依次标记下列信息:

——品种；

——鹿号；

——数量；

——活力；

——生产日期；

——生产单位。

5采精

5.1种公鹿

应具有种用价值，个体符合本品种标准，综合鉴定等级一级或特级，三代系谱资料完整，体质健康，无规定疫病。

5.2采精方法

采用电刺激采精方法，应按照附录A的规定执行。

5.3采精频率

繁殖期内，青年公鹿（2.5岁～3岁）两周采精1次；成年公鹿（4岁～10岁）每7天～10天采精1次。

6精液品质评定

6.1质量要求

新鲜精液应符合下列条件：

a)色泽乳白色或灰白色；

b)精子活力≥65%；

c)精子密度≥6×108个/mL；

d)精子畸形率≤15%。

6.2评定方法

6.2.1外观检查

精液应为乳白色或灰白色，略带腥味，不应含有脓性分泌物。

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6.2.2精液量

采用目测法，用肉眼直接观看量筒上刻度（精确到0.1mL）读取数量值，单位为mL。

6.2.3精子活力

取精液10μL于载玻片上，加盖盖玻片后在37℃恒温装置的显微镜上观察前进运动的精子所占比例，确定活力。每个样片至少观察3个视野，取其活力平均值。

6.2.4精子畸形率

在检查精子活力时，观察视野中畸形精子数占精子总数的百分率。

6.2.5精子密度

测定应使用精子密度测定仪器，按照仪器操作规程进行精液密度测定。

7精液稀释

7.1稀释液量的确定

根据精液的活力、密度、采精量、每个输精剂量所含有效精子数等指标计算。

稀释液量按公式（1）进行计算。

V=0.23-L………………（1）

式中：

V——稀释液量，单位为毫升（mL）；

L——采精量，单位为毫升（mL）；

P——精液密度，单位为亿个/mL；

M——解冻后预估的精子活力；

Z——每支细管冻精所含有效精子数，单位为亿个；

0.23——每支细管精液容量，单位为毫升（mL）。

7.2稀释方法

用经32℃水浴加温的稀释液加入精液中至最终稀释量。稀释时，把稀释液沿着精液容器的壁缓缓加入精液中，轻摇混匀。

7.3活力检查

精液稀释后，按照6.2.3规定的方法评定活力。

8精液分装与平衡

8.1精液分装

8.1.1人工分装

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精液稀释10min后，在22℃~25℃环境条件下，使用可调的移液枪进行分装，分装后用封口粉（聚乙烯醇粉）封口，封口长度10mm～15mm。

8.1.2机械分装

精液稀释10min后，在22℃~25℃环境条件下，用灌装机进行精液的分装、标识和封口。

8.2精液平衡

分装后的细管精液放在塑料盒中或用毛巾包裹，放入3℃~5℃冷藏柜中平衡3h～4h。

9精液冷冻

9.1上架

在4℃~6℃低温条件下，把细管精液码放在托架上。码放时把棉塞端靠近操作者，封口端远离操作者，放进冷冻箱时也应如此摆放。如同一个托架上有不同鹿的细管精液，应分开码放。

9.2冷冻

9.2.1简易冷冻箱

冷冻箱要有良好的隔热性能，深度应在50cm以上。使用前加入液氮预冷，液氮面的高低应根据冷冻细管精液的数量多少