果汁中植物源性成分的测定.docx

食品补充检验方法

BJS202304

果汁中植物源性成分的测定

2023-06-13发布

国家市场监督管理总局发布

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BJS202304

果汁中植物源性成分的测定

1范围

本方法规定了果汁中黑加仑(RibesnigrumL.)、蓝莓(vacciniumspp.)、树莓(RubusidaeusL.)、木瓜(pseudocydoniasinensisL.)、桑葚(MorusalbaL.)、椰子(cocosnuciferaL.)、猕猴桃(ActinidiachinensisPlanch.)、杏(prunusarmeniacaL.)、山楂(crataegusspp.)、蔓越莓(vacciniummacrocarponAit)、芒果(MangiferaindicaL.)、梨(pyrusspp.)、桃(prunuspersicaL.)、苹果(MaluspumilaMill.)、葡萄(vitisviniferaL.)、草莓(Fragariaananassa)、橘(citrusreticulata)、橙(citrussinensis)等植物源性成分鉴定的实时荧光PCR和DNA条形码定性检测方法。

本方法适用于果汁样品标识含有特定植物源性成分的定性检测。其中,实时荧光PCR方法适用于果汁、果浆以及果肉饮料等样品中黑加仑、蓝莓、树莓、木瓜、桑葚、椰子、猕猴桃、杏、山楂、蔓越莓、芒果、梨、桃、苹果等单一植物源性成分的定性检测;DNA条形码方法适用于果汁、果浆及果肉饮料等样品中黑加仑、蓝莓、树莓、木瓜、桑葚、椰子、猕猴桃、杏、山楂、蔓越莓、芒果、梨、桃、苹果、葡萄、草莓、橘、橙等多种植物源性成分的非靶标测定。

2方法一:实时荧光PCR法

2.1原理

提取试样中基因组DNA,以DNA为模板,利用物种特异性引物及探针进行实时荧光PCR扩增检测。根据扩增的Ct值,判定试样中是否含有该源性成分。

2.2试剂和材料

除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

2.2.1检测用引物和探针见表1。

表1引物探针序列

目标物种

引物/探针序列(5I→3I)

基因来源

内参照

F:TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA

18SrRNA

R:AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT

P:FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC-TAMRA

黑加仑

F:TGCCCAAGCAGAGCTTCTG

18SrRNA

R:CAACCAGGTAGCATTCCTTTGC

P:FAM-TTGGCTCATGCGACGCCCG-BHQ1

蓝莓

F:AGCAACATGACGTCATATATCCACT

maturaseK

R:GAATACAAATTTGTATTGTACCCCA

P:FAM-TGCACTTGCTCATGATCGTGGTTTAAATAGATT-TAMRA

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表1引物探针序列(续)

目标物种

引物/探针序列(5I→3I)

基因来源

树莓

F:GTTATTCGTTGGAACCGTAGGAA

ndhF

R:GACTGAAAAAACTGCATTTGTGA

P:FAM-ATTATCCAAATTGTTAACCCCGTCCATAAACCT-TAMRA

木瓜

F:AGTGGCTCAATATGGTATTCACTACAGA

papain

R:AAAATGTAGATATACCTCCCTTGAGCG

P:FAM-ATACTTACCCATATGAGGGAGTGCAACGTTATTG-TAMRA

桑葚

F:CTATGCGATTGCTTCACGCTAT

TBP

R:ATCTGGAGGCATTGACCACTCA

P:FAM-AAAAGATTCTTCCTCATGCACGCCGA-TAMRA

椰子

F:ACAAGACCTACTGGACTGG

prk

R:TCTGATATGTATAAGACTCAGCA

P:FAM-AATTGTCTCATTATCTCAATGAACCGGGTG-BHQ1

猕猴桃

F:GCCCCATGGGTGACACTCT

ITS

R:AAGTTCCTTGA