实验三植物不定芽诱导与快繁技术.ppt

第四章器官培养宜职院08.9目的与要求了解离体根培养的实践意义，掌握离体根的培养方法，熟悉离体根培养的培养基配方。了解植物茎尖培养的意义，掌握茎尖培养的方法，以及茎尖微繁技术。掌握叶培养概念，离体叶组织培养方法，了解影响叶片组织脱分化和再分化因素。具有植物离体根培养的认知和进行根培养的基础能力，具有熟练进行植物茎尖培养和茎段培养的能力，具有叶培养认知和进行叶培养的基础能力。第一节根的培养一、根培养的实践意义对根细胞培养物进行诱变处理，可筛选突变体，用于育种实践。建立快速生长的根无性系，对药物生产有重要意义。是进行根系生理代谢研究的最优良试验体系。是研究器官分化、形态建成的良好体系。离体根的培养方法培养步骤：离体根培养的第一步是要获得无性繁殖系。方法如下：种子表面消毒——无菌条件下萌发——根伸长后切取1.0cm长的根尖——接种于培养基——侧根生长——切取侧根的根尖扩大培养——获离体根无性系胡萝卜根培养一般方法100ml三角瓶，内装40-50ml培养液，如长时间培养，可采用大型器皿500-1000ml培养液的发酵瓶进行培养。根据需要可在瓶中添加新鲜培养液继续培养或分割转移后继代培养。为避免培养过程中培养基成分变化对生长的影响，可采用流动培养方法。2、根瘤菌结瘤实验的特殊方法Raggio1965年等设计了离体根的结瘤实验装置。此装置由两个部分组成，下部是试管，管中装有含无机盐的营养液，并接种根瘤菌，上部是玻璃盖，盖中有一单向开口的管状凹槽，槽中盛放含有有机化合物的琼脂固体培养基。故有机营养从根基部吸收，无机营养从根尖吸收。Raggio装置Bunting和Horrocks1964年修改了Raggio等的装置，变为在粗沙中提供无机盐。利用这一技术研究菜豆、大豆等离体根根瘤菌的固氮情况，结果表明这些根瘤菌含有血红蛋白，并能固定大气中的氮。离体根培养所用的培养基离体根培养多用无机离子浓度低的White培养基或其他培养基，MS、B5等也可采用，但必须将其浓度稀释到2/3或1/2。苜蓿离体根的培养液和西红柿离体根的培养液如下：成份苜蓿浓度(mg/L)西红柿浓度(mg/L)Ca(NO3)2.4H2O200143.9Na2SO4200100KCl6540KNO382NaH2PO4.2H2O18.610.6MgSO4.7H2O740368.5MnSO4.4H2O4.53.35FeC6H5O7.3H2O4.2.25ZnSO4.7H2O2.71.34H3BO31.50.75KI0.80.38CuSO4.5H2O0.0040.002MoO30.020.01甘氨酸3