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2025-01-18 发布于上海
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实验四细菌转导.ppt

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实验四细菌转导厦门大学生命科学学院通过大肠杆菌噬菌体专一性转导半乳糖发酵基因学习掌握局限性转导的原理，掌握转导实验的基本方法实验目的噬菌体介绍噬菌体是指细菌病毒生活周期：吸附、侵入、复制合成、装配、释放烈性噬菌体如T4温和噬菌体如?、Mu-1、P1和P2等噬菌体结构噬菌体组装λ噬菌体载体证明遗传物质是DNA而非蛋白质的Hershey-Chase实验溶源菌的形成?噬菌体整合进大肠杆菌染色体中的固定位点上，这个位点在gal(半乳糖代谢基因)和bio(生物素合成基因)之间，这位点称为BOB’，它与?的附着位点POP’有相同的核心序列区，由15bp组成，它们通过同源单交换发生整合，形成溶源菌。实验原理020103P1和P2普遍性转导以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体）的遗传物质传递给另一个细胞（受体）的过程。转导定义：λλdgλdb局限性转导菌株：E.colik12(λ)gal+k12Sgal-用品：Eppondoff离心管(1.5ml/4.5ml)Tip枪头(1ml/200ul/20ul)培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤/EMB)试剂：氯仿、磷酸buffer实验材料实验步骤噬菌体的诱导和裂解液的制备取4mlgal+菌液至离心管，4000rpm，5min倒去上清，加3ml磷酸buffer，震荡悬浮将悬浮液倒入培养皿，UV照射处理10s加入3ml加倍肉汤，37℃避光培养2h取0.8ml培养液于小离心管，加入0.2ml氯仿剧烈震荡半分钟，6000rpm,10min得到的上清液即噬菌体裂解液