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目录
摘要I
ABSTRACTIII
缩略词V
第一章文献综述1
1柑橘衰退病概述1
2柑橘蚜虫及防治技术1
2.1柑橘蚜虫1
2.2蚜虫的防治方法和局限性2
2.3RNAi的作用机制及其研究现状3
3RNAI技术在害虫控制中的应用4
3.1RNAi实施策略4
3.2昆虫中dsRNA递送方式5
3.3影响RNAi效率因素7
3.4国内外RNAi在害虫防治中研究进展与挑战8
4本研究目的和意义9
第二章靶标基因dsRNA的合成及致死基因的筛选11
1材料与方法12
1.1供试虫源与生物材料12
1.2候选靶标基因的确定12
1.3柑橘蚜虫靶标基因的引物设计13
1.4蚜虫RNA的提取13
1.5cDNA的合成14
1.6目的基因的克隆14
1.7琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物15
1.8胶回收目的基因片段15
1.9L4440干扰载体的构建16
1.10重组质粒转化与鉴定17
1.11大肠杆菌HT115（DE3）诱导表达dsRNA19
1.12蚜虫人工饲养液的配置19
1.13浸泡加植物叶片饲喂法筛选柑橘蚜虫致死基因20
1.14实时荧光定量PCR检测基因的表达量21
2结果与分析22
2.1基因的克隆与L4440干扰载体构建22
2.2蚜虫靶标基因dsRNA的诱导表达分析22
2.3浸泡加植物叶片饲喂法筛选柑橘蚜虫潜在致死基因23
2.4dsRNA对柑橘蚜虫靶标基因表达的影响24
2.5不同浓度dsRNA对柑橘蚜虫死亡率影响25
2.6混合施用dsRNA对柑橘蚜虫死亡率影响26
2.7添加dsRNase对柑橘蚜虫死亡率的影响27
3结论与讨论30
第三章dsRNA药剂施用条件的探究及其应用33
1材料与方法34
1.1供试植物材料34
1.2植物种子消毒34
1.3测定植物对dsRNA的最大耐受浓度34
1.4dsRNA在植物系统中的传输35
1.5植物中施用dsRNA防治柑橘蚜虫的研究36
2结果与分析37
2.1植物种子萌发最大耐受dsRNA浓度37
2.2植物生长发育最大耐受dsRNA浓度37
2.3dsRNA在植物系统中传输的确定40
2.4叶柄输送dsRNA对柑橘蚜虫死亡率的影响41
2.5喷施dsRNA药剂对柑橘蚜虫死亡率的影响42
2.6体外施用dsRNA药剂对植物内源基因表达的影响43
3结论与讨论45
全文总结47
论文主要创新点与不足49
参考文献51
攻读硕士期间发表的文章59
基金项目61
致谢63
筛选靶向柑橘衰退病介体昆虫特异基因的dsRNA
及其应用
摘要
柑橘作为世界水果之王，种植面积和产量都雄居各类水果之首，但病虫害严重
影响柑橘产业的健康发展。柑橘衰退病是是柑橘最具破坏性的病害之一，由柑橘衰
退病毒（Citrustristezavirus，CTV）引起。CTV可通过多种介体蚜虫进行传播，并
在世界各地的柑橘种植园中蔓延，造成重大经济损失。现有技术控制柑橘蚜虫主要
依赖化学农药进行防治。但产业中化学农药乱用滥用问题突出，蚜虫抗药性不
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