砂梨再生和遗传转化体系的优化研究.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

缩略词V

引言VII

第一章文献综述1

1植物组织培养1

1.1植物组织培养研究进展与应用1

1.2植物组织培养的优势与存在的问题3

1.3梨组织培养研究进展4

2梨组织再生体系的研究5

2.1影响梨组织再生的主要因素5

2.2梨组织再生的研究进展7

3梨遗传转化7

3.1梨在遗传转化过程中存在的问题8

3.2梨遗传转化的研究进展8

3.3影响梨遗传转化的因素9

4本研究的目的和意义10

第二章砂梨再生体系的优化11

1试验材料11

2试验方法11

2.1‘翠冠’、‘丰水’外植体的获取11

2.2筛选促进梨外植体再生的激素配比11

2.3暗培养对子叶再生频率的影响13

2.4不同梨品种扩繁再生生长效果的评价13

2.5数据调查及统计分析13

3结果分析13

3.1激素配比对不同组织来源的愈伤再生的影响13

3.3‘丰水’子叶再生动态14

3.4激素配比对不同品种来源外植体再生的影响15

3.5暗培养对再生的影响23

3.6光照强度对诱导愈伤再生的影响24

3.7不同梨品种扩繁的再生效果25

4讨论26

第三章砂梨遗传转化体系的优化研究29

1试验材料29

2试验方法29

2.1标记基因Luciferase的克隆29

2.2目的基因PbSOC1a的克隆30

2.3表达载体的构建31

2.4目的载体对农杆菌的转化33

2.5Luciferase功能验证33

2.6Cef敏感性试验34

2.7对‘丰水’子叶的遗传转化34

2.8数据调查及统计分析35

3结果分析35

3.1标记基因Luciferase功能验证35

3.2Cef浓度对‘丰水’子叶不定芽的影响36

3.3预培养时间对‘丰水’子叶侵染的影响37

3.4农杆菌浓度对‘丰水’子叶侵染的影响39

3.5共培养时间对‘丰水’子叶侵染的影响40

3.6侵染时间对‘丰水’子叶侵染的影响41

4讨论42

全文结论45

主要创新点47

参考文献49

致谢55

砂梨再生和遗传转化体系的优化研究

摘要

梨是我国重要的水果，我国梨种质资源丰富，栽培面积和产量均居世界前列。

梨适应性强，寿命长，经济利用年份久，栽培分布较广。作为木本植物，梨童期

较长，常规的梨杂交育种通常需要5-10年才能获得稳定的优系。随着植物组织

培养技术和生物技术的发展，可以人为控制培养条件，缩短育种年限，提高繁殖

率，通过转基因手段定向改良梨品质。本实验是以砂梨‘翠冠’、‘丰水’为实验

材料，试验不同的生长调节剂配比，探索不同品种不同组织的再生效果，以期建

立稳定高效的再生体系，在此基础上通过调节预培养时间，共培养时间，菌液浓

度，侵染时间，抗生素浓度，初步建立砂梨遗传转化体系。尝试将梨成花基因

PbSOC1a和荧光素酶（Luciferase）导入梨的外植体内，通过活体成像的方式快

速筛选出转基因植株。主要研