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类器官的建立及应用

类器官（Organoids）指利用成体干细胞或多能干细胞进行体外三维（3D）培养而形成的具

有一定空间结构的组织类似物。这些3D体外培养系统可复制出已分化组织的复杂空间形态，

并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态。能更好

地用于模拟器官组织的发生过程及生理病理状态，因而在基础研究以及临床诊疗方面具有广

阔的应用前景。

类器官的发展历程：

图

1.类器官的发展历程1907年，HenryVan发现物理分离的海绵细胞可以重现聚集，自行组

成一个新的功能完善的海绵。在接下来的几十年里，脊椎动物中也发现了相似的细胞分离再

聚合现象，例如1944年Holtfreter的两栖动物肾组织实验和1960年Weiss的禽类胚胎实验。

1961年Piercehe和Verney观察到胚状体的体外分化，随后在1964年Steinberg提出了细胞

分化的差异粘附假说（DAH），1981年多功能干细胞（PSCs）被首次从小鼠的胚胎中分离

出来，干细胞研究自此蓬勃发展。

1987年李茂林等人通过模拟生物体内微生物环境优化了细胞培养条件。研究表明，EHS

(小鼠肉瘤：Engelbreth-Holm-Swarm)ECM(细胞外基质：extracellularmatrix)提取物中，乳腺

上皮细胞可组织成3D导管和小导管，此外，ShannonJM在ECM细胞中发现肺泡Ⅱ型上皮

细胞分化。但是直到1998年，美国生物学家JamesThomson才首次从人胚泡中分离培养出

人胚胎干细胞。

2006年，通过对小鼠和人成纤维细胞进行重组编程，成功制备了人诱导多能干细胞

(iPSCs)，这对干细胞和类器官研究有重大意义。2008年，Sasai等人通过展示人类大脑诱导

多能干细胞自组织到形成极化皮质组织的神经细胞，奠定了类脑器官的基础。2009年，Hans

Clevers和他的同事首次证明了单个Lgr5+肠道干细胞（ASCs）可以自行组织分化形成包含所

有肠细胞类型的肠隐窝-绒毛结构.这开启了类器官技术发展的新时代。在此基础上类器官模

型成为替代传统细胞系和异质动物模型的新型研究模型。2010年，研究发现小鼠胚胎肾干

细胞分离再组合可形成肾类器官。肠类器官可从体外诱导多能干细胞生成。

Nakano等在2012年证明了在三维构建中PSCs自行组织成为了视杯结构。2013年，人

类大脑类器官由小头患者的iPSCs细胞分化形成。Lee等人发现内皮细胞和成年细支气管肺

泡干细胞在三维共培养模式下可产生肺类器官。乳腺、输卵管和海马类器官是在2015年研

究得出的，蛇毒腺类器官产生于2020年。类器官模型的构建：目前3D类器官培养技术已

经成功培养出大量具有部分关键生理结构和功能的类组织器官，常见的类器官可以分为两大

类：组织细胞来源类器官（如肿瘤类器官）和多能干细胞来源类器官（如肠类器官、脑类器

官）。1、小肠类器官培养：（1）解剖6-8周的小鼠，取胃以下约10cm的小肠，镊子去肠

系膜，剪刀沿肠道剪开，用预冷的PBS洗3-5次，用载玻片小心的将小肠表面的绒毛刮去

（显微镜下镜检），将刮好的小肠放入50ml离心管中，置于冰上；（2）将小肠转移至生物

安全柜中，用含双抗的PBS清洗3-5次，将小肠转移至25ml2mmol/L的EDTA的溶液中4℃

冰箱中消化30min；（3）将消化好的小肠转移至50ml离心管中用含双抗的PBS清洗2次；

（4）加入25mlPBS适当摇晃30-50下，取部分悬液镜检。悬浮液用70um的过滤筛过滤到

新的50ml离心管中；（5）重复步骤4，两次收集的滤液800rpm离心5min；（6）弃上清，

用2ml的DMEM重悬沉淀，取适量的悬液计数；隐窝的数量控制在5-15个/ul最佳；（7）

取适当体积的悬液加入到1.5ml的离心管中，室温下800rpm离心5min；（8）弃上清，用预

冷的基质胶重悬（需充分混匀）；（9）接板，24孔板接50ul的重悬液（注：基质胶种在孔

中间避免贴壁）；（10）将接种好的板于培养箱中放置20-30min；（11）每孔加500ul完

全培养基，然后每隔2-3天换一次培养基，5-7天传代一次。