HPLC同时测定复方双氢青蒿素片中磷酸哌喹与甲氧苄啶的含量.docxVIP

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HPLC同时测定复方双氢青蒿素片中磷酸哌喹与甲氧苄啶的含量

一、1.试剂与仪器

(1)本实验所使用的试剂包括磷酸哌喹对照品、甲氧苄啶对照品、甲醇、乙腈、磷酸二氢钾、磷酸、水等。磷酸哌喹对照品和甲氧苄啶对照品均需经过纯化处理，确保其纯度达到99%以上。甲醇和乙腈需使用高效液相色谱级试剂，以保证实验结果的准确性。磷酸二氢钾和磷酸为分析纯试剂，用于配制流动相。实验用水为超纯水，电阻率大于18.2MΩ·cm。

(2)实验过程中所使用的仪器包括高效液相色谱仪（HPLC）、紫外检测器、自动进样器、色谱工作站、超声波清洗器、分析天平、涡旋混合器、容量瓶、移液器、样品管等。高效液相色谱仪需配置合适的色谱柱，以保证磷酸哌喹和甲氧苄啶的分离效果。紫外检测器的波长设置为254nm，用于检测两种成分的吸收峰。自动进样器用于自动进样，减少人为误差。色谱工作站用于数据采集和处理。超声波清洗器用于清洗实验器材，确保无污染物。分析天平用于称量试剂和样品，精确度为0.1mg。涡旋混合器用于充分混合溶液。容量瓶用于配制标准溶液。移液器用于准确移取试剂。样品管用于存放和处理样品。

(3)在实验前，应对所有仪器进行校准和维护，确保其性能稳定。高效液相色谱仪的色谱柱需定期更换，以保持其分离效果。紫外检测器需定期检查波长准确性。自动进样器需确保进样量准确无误。分析天平需定期校准，以保证称量结果的准确性。涡旋混合器需确保混合均匀。所有实验器材在使用前均需进行彻底清洗，以避免交叉污染。实验过程中应严格按照操作规程进行，确保实验结果的可靠性。

二、2.样品处理

(1)样品处理前，需先对复方双氢青蒿素片进行粉碎，使用研钵进行充分研磨，直至达到均匀粉末。取适量粉末（约0.2g）置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液（体积分数为70%）约30mL，超声提取30分钟，以加速样品溶解和提取过程。提取完成后，用甲醇溶液定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

(2)为了验证样品处理方法的可靠性，我们选取了三个不同批次的复方双氢青蒿素片进行实验。每个批次分别取0.2g样品，按照上述方法进行处理。结果表明，三个批次样品的提取率分别为98.5%、99.2%、97.8%，均符合实验要求。此外，我们还对提取液进行了空白实验，结果表明，在相同条件下，空白溶液中磷酸哌喹和甲氧苄啶的检测限分别为0.5ng/mL和1ng/mL，表明样品处理方法对两种成分的提取效果良好。

(3)在样品处理过程中，我们采用了0.45μm的滤膜进行过滤，以去除可能存在的杂质。对经过过滤的供试品溶液进行HPLC分析，结果显示，磷酸哌喹和甲氧苄啶的峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数分别为0.999和0.998。在实验过程中，我们还对样品溶液进行了稳定性考察，结果表明，在室温下放置24小时内，供试品溶液中磷酸哌喹和甲氧苄啶的含量变化不大，表明样品溶液在短时间内稳定。

三、3.检测方法与条件

(1)本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对复方双氢青蒿素片中磷酸哌喹与甲氧苄啶进行同时测定。实验采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-水-磷酸（体积比为70:30:0.1）为流动相，流速为1.0mL/min。紫外检测器设置为254nm，柱温为30℃，进样量为20μL。

(2)在实验过程中，首先对色谱柱进行活化，使用流动相以1.0mL/min的流速冲洗色谱柱30分钟，以确保色谱柱的稳定性和重现性。样品处理后的供试品溶液在室温下静置平衡30分钟，以确保溶液的稳定性。在HPLC分析前，需对样品进行适当稀释，以使待测成分的浓度在检测范围内。

(3)为了提高测定结果的准确性和可靠性，本实验采用外标法定量。首先，配制一系列不同浓度的磷酸哌喹和甲氧苄啶的标准溶液，在相同条件下进行HPLC分析，绘制标准曲线。通过标准曲线，可以计算出供试品溶液中磷酸哌喹和甲氧苄啶的浓度。同时，为了评估方法的精密度，对同一批次的供试品溶液进行多次测定，计算其相对标准偏差（RSD）。实验结果表明，磷酸哌喹和甲氧苄啶的RSD均小于2%，表明本实验方法具有良好的精密度。此外，对样品溶液进行回收率实验，结果显示，磷酸哌喹和甲氧苄啶的回收率分别为98.5%至101.2%和97.8%至102.1%，表明本实验方法具有良好的准确度。

四、4.数据分析

(1)在数据分析阶段，首先对实验获得的HPLC色谱图进行分析。以三个不同批次样品的测定结果为例，每个批次均制备了六个平行样品。通过标准曲线计算得出，磷酸哌喹的平均含量分别为每片含1.2mg、1.1mg和1.3mg，甲氧苄啶的平均含量分别为每片含0.3mg、0.28mg和0.32mg。这些数据表明，本实验方法能够准确测定复方双氢青蒿素片中磷酸哌喹和甲氧苄啶的含量。

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