药品生物检定的基础知识—微生物接种和培养技术.pptx

接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

接种方法：斜面接种、穿刺接种等。

选择一种好的接种方法，对于微生物的分离、纯化、增殖和鉴别等都很重要。

为了确保纯种不被杂菌污染，在整个过程中，必须进行严格的无菌操作。;主要内容;一、微生物接种技术;（一）接种工具;（一）接种工具;（二）无菌操作;接种环境

;于接种之前打开接种室和超净工作台紫外灯消毒30min，同时打开风机；

接种时必须关闭紫外灯;要点：防止污染，严格的无菌操作

接种者的双手要进行消毒处理，一般用75%酒精或0.01%新洁尔灭擦洗

整个操作过程都要靠近酒精灯火焰

接种工具、管、瓶口接种前后要通过灼烧灭菌

棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上

不能用嘴直接吸吹吸管。

不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。

;（三）接种操作方法;接种的基本程序;1、液体接种法

将菌种接种到液体培养基（试管、三角瓶）中的方法。

接种目的：细菌的增菌培养和进行细菌的生化反应等。

操作方法

;液体接种法操作方法;2、半固体培养基法：此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。;3、斜面接种法

把各种培养条件下的菌种，接入斜面上。最常用、最基本的技术之一。

用于好气性微生物的接种。

;（1）标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名

（2）点燃酒精灯。

（3）接种：

1）手持试管将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。

2）旋松管塞

3）接种环灼烧灭菌;;;;;斜面接种示意图;斜面接种法及接种后菌落生长示意图

;接种后菌落生长示意图菌苔(lawn);分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

;1、平板划线分离法

目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、活菌计数。

方法：

分区划线法：适用于含菌量较多的标本

连续划线法：适用于含菌量较少的标本。;连续??线分离法：最常使用的、最基本的方法，其中图B常用于含菌量较少的标本。;分区划线法示意图;分区划线法示意图

?

;五段分区法;;菌落（S型）;;2、倾注分离法：本法用于微生物限度检查中细菌、霉菌的计数。;3、涂布分离法：主要用于活菌计数和药敏试验。;三、微生物培养方法;1、固体培养法

是指将微生物接种在固体培养基表面，在适宜的条件下进行生长的方法。

例如平板培养、斜面培养。

2、液体培养法

是指将菌种接种到液体培养基内，在适宜的条件下进行生长的方法。可用于增菌。

例如浅层液体培养、发酵罐培养。

;1、需氧培养法（好气培养）

在培养过程中，需加入氧气，否则不能良好生长。如大肠杆菌、金葡菌。

方法：平板培养、斜面培养、通气搅拌培养、液体振荡培养

2、厌氧培养法（厌气培养）

这类微生物在培养时不需要氧分子参与。如破伤风杆菌、乳酸菌

方法：深层液体培养；还可以用物理、化学方法、生物学方法创造无氧条件

;;;（一）实训目的;（二）材料和用具;（三）实验内容;（四）实验步骤;（五）实训小结

（六）思考题

1．接种针（环）为什么要在取菌种前将镍鉻丝灼烧至烧红，并冷却后再取菌种？

2．在平板分区划线分离时需要注意的要点有哪些？

3．请思考当接种完毕后，如何进行接种器材的清洗和消毒处理？