艾滋病筛查实验室标准操作规程.docx

艾滋病筛查实验室标准操作规程

人类免疫缺陷病毒抗体检测（酶联免疫法）

科华生物

操作方法：

将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即时封存。

用去离子水合蒸馏水25倍稀释浓缩洗涤液。

将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔每次实验需设外部对照阳性对照2孔、阴性对照1孔。

在样品孔中加入100ul待测样品，阴性、阳性对照及外部对照每孔加入100ul，轻拍混匀。

置37℃温育60分钟。

置洗板机用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。

每孔加入100ul酶标记物，轻拍混匀，置37℃温育30分钟。

重复步骤⑥。

在所有孔内加显色A、显色B剂各50ul，轻拍混匀，置37℃避光温育30分钟。

每孔加入50ul终止液终止显色反应，用酶标仪（双波长450nm/630nm）测定各孔A值。

结果判定：

临界值Cutoff＝0.1﹢阴性对照的平均A值（阴性对照的平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算），样品的A值≥Cutoff值为艾滋病抗体阳性；样品的A值〈Cutoff值为艾滋病抗体阴性。

同时满足以下条件的实验是有效的。

NC0.080

PCx0.8，抗-艾滋病-2阳性对照OD值0.3

双波长读数，显色剂空白≦0.040，单波长读数，显色剂空白≦0.080.

计算COV：COV=PCxX10%（若PCx2.5按2.5计算）

初筛阳性者应重新取样进行双盲复试，复试阳性者应按照“全国艾滋病检测管理规范”送艾滋病确认实验室进行相关确认试验。

万泰生物

操作方法：

配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型，2型各1孔，空白对照1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。

加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性对照100ul.

温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干。

加酶：每孔加入酶标试剂100ul，空白孔除外。

温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育30±1分钟。

洗板：操作同步骤5.

显色：每孔加入显色剂A，B液各50ul，轻轻振荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。

测定：每孔加终止液50ul，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm/600-650nm），用空白孔凋零后测定各孔A值。

结果判读：

阴性对照孔A值≤0.10，阳性对照孔A值≥0.80，否则实验无效。

若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃；若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，实验无效。

阴性判定：样品A值＜临界值（CUTOFF）者为艾滋病抗体阴性。

阳性判定：样品A值≥临界值（CUTFF）者为艾滋病抗体阳性（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者按《全国艾滋病检测技术规范》送艾滋病确证实验室进行确证实验。）

丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）

操作步骤：

配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂）其余各孔加入100UL样本稀释液。

加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。

温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。

洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干。

加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。

温育：置37oc温育30分钟。

洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干

显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振匀，37oc避光显色30分钟。

终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀。

测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长450nm或双波长450nm/600-650nm测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。

结果判断

临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02计算）

阳性判定：样品A值≥临界值（CUTOFF）者判定为抗HCV阳性。（注意初试阳性应重新取样双孔复试）

阴性判定：样品A值〈临界值（CUTOFF）者判定为抗HCV阴性。

梅毒螺旋体抗体（酶联免疫法）

操作步骤：

配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）

加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照100微升，轻轻振荡混匀。

温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。

洗涤：揭掉封版膜，用