细胞破碎与分离设备.ppt

2）等密度离心细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在该层达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。A移动区带离心B等密度离心制备性离心机分析性离心机：超速离心机普通离心机高速冷冻离心机工业型离心机超速离心机实验型离心机离心机分类是传统离心机，为目前工业上应用最广泛的离心机。分离因数可达1000-20000，最大处理量达到300m3/h，常用于大规模的分离过程。适用范围细菌、酵母菌、放线菌、细胞碎片碟片式离心机管式离心机是一种分离效率很高的离心分离设备，其转鼓细长，可在15000-50000的高转速下工作，分离因数可达104-6×105。它设备简单、操作稳定。适用范围细胞、细胞碎片、细胞器、病毒、蛋白质、核酸等。特别适合一般分离机难以分离的固形物含量1%发酵液的分离。管式离心机TritonX-100牛黄胆酸钠十二烷基磺酸钠表面活性剂可促使细胞某些组分溶解，其增溶作用有助于细胞的破碎。（1）表面活性剂主要是处理G-细菌，对细胞外层膜有破坏作用。EDTA将Ca2+或Mg2+螯合，大量的脂多糖分子将脱落，使细胞壁外层膜出现洞穴。这些区域由内层膜的磷脂来填补，从而导致内层膜通透性的增强。（2）EDTA螯合剂能分解细胞壁中的类脂，使胞壁膜溶胀，细胞破裂，胞内物质被释放出来。乙醇、异丙醇、甲苯、苯、氯仿、二甲苯及高级醇等。01与水中氢键作用，削弱溶质分子间的疏水作用，从而使疏水性化合物溶于水溶液。盐酸胍和脲是常用的变性剂。02（3）有机溶剂缺点：对产物释放有一定的选择性，可使一些较小分子量的溶质如多肽和小分子的酶蛋白透过，而核酸等大分子量的物质仍滞留在胞内；细胞外形完整，碎片少，浆液粘度低，易于固液分离和进一步提取。通用性差；时间长，效率低；有些化学试剂有毒。化学渗透法优点：01将浓缩的菌体悬浮液冷却至-25℃形成冰晶体，利用500MPa以上的高压冲击，使冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。细胞破碎是由于冰晶体的磨损，使包埋在冰中的微生物变形而引起的。02此法主要用于实验室，适应范围广、破碎率高、细胞碎片粉碎程度低及活性保留率高等优点，但不适应于对冷冻敏感的生化物质。1.X-press法其他方法将细胞放在高渗透压的介质中（如一定浓度的甘油或蔗糖溶液），达平衡后，转入到渗透压低的缓冲液或纯水中，由于渗透压的突然变化，水迅速进入细胞内，引起细胞溶胀，甚至破裂。仅适用于细胞壁较脆弱的细胞或细胞壁预先用酶处理或在培养过程中加入某些抑制剂（如抗生素等），使细胞壁有缺陷，强度减弱。渗透压法（Osmoticpressure）将细胞放在低温下突然冷冻而在室温下缓慢融化，反复多次而达到破壁作用。一方面使细胞膜的疏水键结构破裂，另一方面胞内水结晶，使细胞内外溶液浓度变化，引起细胞膨胀而破裂。适用于细胞壁较脆弱的菌体，破碎率较低，需反复多次。01反复冻结-融化法02此法使细胞结合水分丧失，从而改变细胞的渗透性。气流干燥主要适用于酵母菌，一般在25-30℃的气流中吹干；真空干燥多用于细菌。4.干燥法气流干燥真空干燥喷雾干燥冷冻干燥1.破碎率的测定直接测定法（革兰氏染色法）导电率测定法目的产物测定法破碎率的测定与破碎技术的研究方向多种破碎方法相结合01与上游过程相结合02与下游工程相结合032.破碎技术的研究方向固液分离设备一、过滤定义：在一定的压力差下，利用多孔性介质截留固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法称为过滤。1无定形颗粒：无烟煤、砂、颗粒活性炭、铁矿砂等2成形颗粒：烧结金属、烧结塑料以及用合成树脂粘结的硅砂、塑料颗粒等，做成圆筒形或板状。5无纺品：纸、毡、石棉板、合成纤维无纺布等。4金属织布：不锈钢丝或铁丝等的织布。3非金属织补棉：化学纤维、玻璃纤维织品、长纤维滤布、短纤维滤布。过滤介质重力过滤 自然过滤1加压过滤 板框过滤2真空过滤 真空过滤器3离心过滤 离心过滤器4根据推动力的不同可分为四类过滤设备的分类STEP1STEP2板框压滤机由压滤机滤板、液压系统、压滤机框、滤板传输系统和电气系统等五大部分组成。板框压滤机工作运行的原理：先由液压施力压紧板框组，料液由中间进入，分布到各滤布之间，通过过滤介质而实现固、液分离的脱液方法。板框过滤机过滤设备广泛应用于培养基制备的过滤及霉菌、放线菌、酵母菌和细菌（需预处理）等多种发酵液的固液分离。适合于固体含量1-10%的悬浮液的分离。滤板与滤框的工作情况优点：结构简单、装配紧凑、过滤面积大、允许采