Slc12a8转运蛋白对结肠癌化疗药物的影响研究.pdf

摘要

癌症的产生是基因突变积累的结果，其中代谢重编程是癌细胞的重要特征之一。

相比于正常细胞的有氧呼吸，癌细胞的生长依赖糖酵解来满足能量需求。糖酵解过程

需要氧化还原辅酶的参与，其中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadenine

+

dinucleotide,NAD）与其还原态NADH组成的氧化还原体系，发挥着重要作用。此

外，NAD+还是脱乙酰化酶家族Sirtuins、肿瘤免疫抑制蛋白CD38、以及多聚ADP-

核糖聚合酶（PARP）的底物，直接或间接影响代谢稳态和DNA修复等许多关键的细

胞功能，以及衰老、癌症等疾病的发生。

近年研究发现，一种位于细胞膜的转运蛋白Slc12a8（溶质载体家族12成员8抗

体），可协助烟酰胺单核苷酸（β-NicotinamideMononucleotide,NMN）的摄取，通过

补救合成途径来补充细胞内NAD+含量。鉴于NAD+代谢在肿瘤发生方面的重要作用，

我们推测Slc12a8或许对肿瘤治疗会有所影响。生物信息学分析表明，Slc12a8在结肠

癌细胞中高表达。因而，以临床化疗常用的DNA损伤型药物为模型，本课题研究了

敲低Slc12a8能否增强药物对结肠癌的治疗、能否通过调控NAD+合成影响DNA的

损伤修复相关、以及对MAPK/ERK通路、EMT通路、细胞凋亡等导致氧化应激和免

疫应答信号的潜在影响。

本文发现，干扰Slc12a8可增加奥沙利铂和阿霉素对结肠癌细胞的致死作用。

Slc12a8表达水平与细胞NAD+的水平呈正相关，并导致细胞内NAD+合成的限速酶

NAMPT的上调。敲低Slc12a8还可导致以NAD+为底物的PARP1和SIRT1表达下调。

鉴于与NAD+代谢相关的CD38在结肠癌细胞中低表达，本文同时对比了过表达CD38

对NAMPT、PARP1和SIRT1的调控，发现与敲低Slc12a8有类似的效果。敲低Slc12a8

或过表达CD38后，增强奥沙利铂和阿霉素诱导的内源性活性氧的水平。而加入NAD+

前体NAM或NMN可大幅逆转ROS的产生，说明Slc12a8和CD38对ROS的影响可

能是通过调控NAD+的水平引起。本文进一步研究了Slc12a8和CD38对细胞迁移的

影响，发现干扰Slc12a8抑制上皮间质转化（EMT）通路，而过表达CD38促进EMT。

蛋白印迹实验结果表明，上述变化与MAPK/ERK通路的活化和细胞凋亡有一定联系。

综上所述，本研究证明敲低Slc12a8通过调控NAD+，可影响PARP1和SIRT1等

参与的修复应答及氧化应激，在一定程度上增强化疗药物对结肠癌细胞的致死作用，

并通过MAPK/ERK通路影响细胞的迁移。这一研究不仅具有重要的基础生物学理论

意义，而且为肿瘤治疗提供了潜在的靶点。

关键词：Slc12a8；CD38；NAD+；PARP1；SIRT1；ROS；

ABSTRACT

Cancerarisesasaresultoftheaccumulationofgeneticmutations,ofwhichmetabolic

reprogrammingisoneofthekeyfeaturesofcancercells.Incontrasttoaerobicrespiration

ofnormalcells,cancercellgrowthreliesonglycolysistomeetenergyrequirements.The

processofglycolysisrequirestheparticipationofredoxcoenzymes,amongwhichthe