APE1的相分离机制及与DNA损伤修复的潜在联系.pdf

摘要

许多神经退行性疾病的发生与蛋白的异常聚集有密切的联系，比如阿尔茨海默症、

帕金森症等，其主要的病理特征是蛋白质异常聚集从而形成淀粉样纤维，蛋白的异常

聚集物往往具有较强的神经毒性，会对细胞产生毒性影响，然而，其致病的具体分子

机制尚不清楚。近年来发现细胞中存在蛋白间的“相分离”现象，导致蛋白间发生聚集，

可能与神经退行性疾病的发生密切相关。另一方面，在衰老过程中，细胞DNA损伤

积累及修复能力下降，同时伴随氧化应激水平的提高，均与神经退行性疾病的发病有

潜在联系。鉴于此，本文中通过研究一种人体细胞中参与碱基修复的关键蛋白AP（无

嘌呤/无嘧啶）核酸内切酶1（APE1）的相分离机制，初步构建DNA损伤细胞模型，

探究APE1及其无序区是否影响DNA碱基损伤修复过程，以及对氧化应激的诱导，

从而探索其与神经细胞病变的潜在联系。

结果显示，APE1蛋白会聚集和形成液滴从而发生相分离现象，此过程与其前35

个氨基酸序列（即无序区）相关。利用拥挤剂模拟细胞内环境，用正置显微镜及浊度

检测表征其相分离能力，发现其相分离能力受拥挤剂的浓度和温度影响，在拥挤剂浓

度为30%、温度为4℃时相分离能力最强；在细胞实验中，本研究通过质粒瞬转，在

PC12细胞中过表达APE1与敲除其无序区的APE1Δ35，用MMS、TMAO及化疗药

物等建立体外DNA损伤细胞模型，通过免疫荧光及ROS检测，发现APE1能够维持

细胞内氧化还原稳态，促进DNA损伤的修复，删除导致APE1相分离的序列后，DNA

修复被影响，ROS水平升高，8-OHDG表达升高，除此之外，本研究利用Westernblot

对炎症因子IL1-β水平进行检测，发现APE1的无序区具有少量抑制细胞炎症的作用；

用TIA1的无序区替换APE1的无序区进一步探究，发现DNA修复仍然会被影响。

本研究验证了APE1蛋白的相分离现象，并在一定程度上揭示了APE1的相分离

现象与DNA损伤修复存在潜在联系。

关键词：APE1；相分离；DNA损伤修复；ROS；8-OHDG

ABSTRACT

Manyneurodegenerativediseasesarecloselyrelatedtoabnormalproteinaggregation,

suchasAlzheimersdiseaseandParkinsonsdisease,andthemainpathologicalfeatureisthe

formationofamyloidfibrilsbyabnormalproteinaggregation.However,thespecific

molecularmechanismofthepathogenesisisnotclear.Recently,ithasbeenfoundthatthe

phenomenonofphaseseparationbetweenproteinsincells,whichleadstoprotein

aggregation,maybecloselyrelatedtothedevelopmentofneurodegenerativediseases.On

theotherhand,thedecreaseinDNAdamageaccumulationandrepaircapacityduringaging,

alongwiththeincreaseinoxidativestresslevels,arepotentiallyassociatedwiththe

developmentofneurodegenerativediseases.Inviewofthis,inthispaperweinvestigate

whetherthephase-separationmechanismofakeyproteininvolvedinbaserepairinhuman

cells,AP(purine-fr