金雀异黄素调节鲤糖脂代谢和缓解内质网应激的作用研究.pdfVIP

摘要

长期摄入高脂和高糖饲料易导致鱼体脂肪蓄积、代谢紊乱。金雀异黄素是大豆异

黄酮的关键活性物质，具有广泛的生理功能。在哺乳动物中，金雀异黄素可发挥抗糖

尿病和降脂作用，但其调节鱼类糖脂代谢的研究相对匮乏。为明晰金雀异黄素缓解高

能饲料对鱼类带来负面影响的机制，本课题探究高能饲料（高脂：11%、高糖：45%）

添加金雀异黄素对鲤糖脂代谢、内质网应激的影响；结合鲤原代肝细胞实验，验证金

雀异黄素对鲤肝细胞糖脂代谢的调节及内质网应激的缓解作用；对养殖实验鱼肝胰脏

转录组数据进行深入挖掘，解析金雀异黄素对鲤糖脂代谢的潜在作用机制。

（1）高脂、高糖饲料添加金雀异黄素对鲤生长、营养组成及血清生化指标的影响

开展为期8周的养殖实验，共分为五组：对照组（CO）、高脂组（HF）、高糖组

（HC）、高脂+500mg/kg金雀异黄素组（FG）、高糖+500mg/kg金雀异黄素组（CG）。

结果显示，金雀异黄素改善高脂、高糖日粮饲喂后鲤的生长性能，终末体质量与特定

生长率增加，HSI和VSI均降低，全鱼及肌肉组织粗脂肪含量下降，血清中TG和T-

CHO含量显著下降，血清中抗氧化相关酶（T-AOC、GSH-PX、SOD）、免疫系统相关

酶（AKP、ACP、LZM）活性增强。结果初步表明，金雀异黄素可缓解高糖、高脂饲

料导致鲤生长的负面影响。

（2）高脂、高糖饲料添加金雀异黄素对鲤肝胰脏、糖脂代谢和内质网应激的影响

HE染色结果显示，HF、HC组鲤肝胰脏脂质积累，表现为TG含量增加，肝细胞

脂质空泡化。FG、CG组肝胰脏中脂质蓄积症状得到缓解。金雀异黄素促进脂质分解

相关基因（hsl、cpt-1、atgl）表达，抑制脂质合成相关基因（fas、acc、srebp-1）表达。

添加金雀异黄素后，血清葡萄糖含量下降，显著上调糖酵解相关基因（gk、hk、pfk）

表达。内质网应激方面，HF组内质网应激伴侣蛋白（grp78）、UPR反应蛋白（xbp-1）

以及HC组UPR反应蛋白（atf6、elf-2α、atf4、xbp-1）的mRNA表达显著升高。FG

组grp78、chop、xbp-1的mRNA水平显著下调。CG组atf6、elf-2α、atf4、chop、xbp-

1的mRNA水平显著下调。此外，HF组自噬凋亡相关基因（bclin1、atg7、caspase9）

表达量显著增加，添加金雀异黄素后，bcl-2的mRNA水平显著增加。表明金雀异黄素

对高脂、高糖日粮导致的鲤内质网应激具有一定的缓解作用。

（3）金雀异黄素对鲤原代肝细胞脂代谢和内质网应激的影响

离体水平，使用油酸和孵育D-葡萄糖鲤原代肝细胞，构建高脂、高糖模型。高脂、

高糖模型的肝细胞TG含量显著增加，且35mMD-葡萄糖孵育肝细胞，糖原含量显著

增加。为进一步验证体内养殖实验结果，50μM金雀异黄素处理高脂模型12h，显著

促进脂解相关基因（lpl、hsl、pparα）表达。此外，50μM金雀异黄素处理原代肝细胞

12h，显著降低内质网应激伴侣蛋白（grp78）和UPR反应蛋白（atf6、atf4）的mRNA

表达水平。100μM金雀异黄素处理高糖模型3h，显著促进脂解相关基因（lpl、hsl、

cpt-1、atgl）的表达，抑制UPR反应蛋白（ire1α、perk）的mRNA表达。50μM和

100μM金雀异黄素孵育鲤原代肝细胞12h，抑制脂质合成相关基因（acc）表达。结果

表明，金雀异黄素在高脂、高糖模型中适宜浓度和诱导时间分别为50μM孵育12h和

100μM孵育3h。

（4）高脂、高糖饲料添加金雀异黄素对鲤肝胰脏的转录组分析

选取HF、HC、FG和CG组鲤肝胰脏进行转录组测序。对糖脂代谢相关的DEGs

进行KEGG富集分析，HFvsFG组胆固醇代谢路径（lpl、lipg、lipc）以及初级胆汁酸

合成路径（hsd3b7、cyp8b1、ch25h）具有显著差异。HCvsCG组胆固醇代谢路径

（lipa、lipg、cyp27a1和lipc）以及初级胆汁酸合成路径（hsd3b7、cyp8b1、cyp7b、

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