克氏原螯虾中含有LRR和Ig结构域的模式识别受体的功能研究.pdf

摘要

克氏原螯虾，俗称小龙虾，因其味道鲜美以及分布广泛和易于饲养等优点，已经

在全世界范围内成为一种具有较高经济价值的养殖品种。但随着人们需求的增加，在

大规模养殖过程中，由于缺少科学理论的指导以及疾病防治的不到位，导致小龙虾养

殖过程中出现病害频发的现象，并且带来了不可忽视的经济损失，从而影响了小龙虾

养殖事业的可持续发展。在这种背景下亟需开展克氏原螯虾免疫防病的基础研究，为

病害防控提供理论指导。模式识别受体可通过识别病原相关分子模式来启动免疫，我

们在克氏原螯虾中发现了一种新的含有LRR和Ig结构域的模式识别受体将其命名为

PcLRRIG。通过研究其免疫功能，得到如下结果：该基因PcLRRIG序列长为3742bp，

其中包含的开放阅读框长度为3045bp,编码1014个氨基酸。通过蛋白结构预测发现，

PcLRRIG包含9个LRR结构域，一个Ig结构域，一个跨膜结构域和一个胞内区；组

织特异性检测发现，不管是在mRNA水平还是在蛋白水平，PcLRRIG都呈多组织分布，

包括肝胰腺、肠道、胃和血细胞；刺激表达模式分析结果显示，在受到金黄色葡萄球

菌和嗜水气单胞菌侵染后，PcLRRIG的表达量明显上升，表明其可能参与小龙虾抗细

菌的免疫应答反应。我们构建了原核表达载体，将其进行了分段表达，成功获得了两

种重组蛋白即rPcLRR和rPcIG。对PcLRRIG进行功能研究发现，它的LRR和Ig结构

域能够结合细菌表面多糖LPS和PGN，从而结合不同的细菌，并具有细菌凝集的能力；

另外还发现PcLRRIG的功能结构域LRR和Ig可以与嗜水气单胞菌的鞭毛蛋白FlaA相

互作用，从而识别嗜水气单胞菌；通过RNA干扰降低PcLRRIG的表达后，克氏原螯

虾在受到嗜水气单胞菌侵染时存活率会下降。进一步的功能研究发现，PcLRRIG可以

促进血细胞吞噬嗜水气单胞菌，并且溶酶体也参与了吞噬后杀灭细菌的过程。

综上所述，本篇研究中，我们在克氏原螯虾中发现了一个新的包含LRR和Ig结构

域的基因PcLRRIG，明确了PcLRRIG在克氏原螯虾的抗细菌免疫应答中有着重要的作

用，即该分子能够通过结合细菌表面多糖和鞭毛蛋白FlaA识别嗜水气单胞菌，并介导

血细胞吞噬嗜水气单胞菌和进一步的细菌清除。这些研究结果为进一步研究克氏原螯

虾的免疫识别提供了理论基础，并且为甲壳动物抵抗疾病侵染提供了参考。

关键词：克氏原螯虾，模式识别受体，LRR结构域，Ig结构域，吞噬作用

ABSTRACT

Procambarusclarkii,commonlynamedasredswampcrayfish,hasbecomeanimportantly

aquaculturespeciearoundtheworldforthegoodtaste,widedistributionandeasybreeding.However,due

tothelackofscientifictheoryguidanceandinadequatedisease-preventionmeasures,varietiesofdiseases

frequentlyoccurredincrayfishcultureandresultedinhugeeconomiclossesduringthelarge-scaleculture

andthenputanadverteffectonthesustainabledevelopmentofthecrayfishfarmingindustry.Inthelight

ofthiscase,itisurgenttoperformthebasicresearchwhichcouldprovidetheoreticalguidancefordisease

preventioninP.clarkii.Itiswellknownthattheinnateimmuneresponseis