拟南芥和水稻RH6_8_12响应病毒作用机制的初步研究.pdf

摘要

摘要

无膜细胞器是细胞的重要组成单元。无膜细胞器通过液-液相分离（liquid-liquid

phaseseparation，LLPS）将特定种类的蛋白、RNA或DNA聚集在一起，自组装形成。

无膜细胞器在调控各种特定的生物化学反应过程中发挥着重要作用。它们不仅能够更加

高效地完成特定的化学反应，还能够快速响应外界环境的变化。所在研究组和其它研究

RNA6RNAhelicase6RH6RH8RH12LLPS

组前期研究发现拟南芥解旋酶（，）、和具有

的性质，能够促进细胞核无膜细胞器切割小体（Dicingbody，Dbody）、细胞质无膜细

胞器加工小体（Processingbody，Pbody）和应激颗粒的形成。这些基因的突变体具有

抗病毒特性，且在突变体中抗性基因的转录和翻译水平均升高。为研究影响此类RNA

解旋酶相变的调控因素，深入解析无膜细胞器的形成机制及与植物抗病毒间的关系，论

文以拟南芥和水稻为模式生物对RNA解旋酶调控植物抗性的分子机制进行了探索。

论文首先原核表达并纯化RH12-His、RH12(DAAD)-His、RH12(SAA)-His和RH12(no

IDR)-HisRH12RNAATP

融合蛋白。通过体外相分离实验，发现拟南芥中解旋功能域、

水解功能域和驱动多价相互作用的IDR区均能够影响RH12自身的LLPS。烟草瞬时表

达系统的荧光漂白恢复实验也表明以上功能域对RH12相分离的影响。实时荧光定量

PCR实验发现RH12的RNA解旋功能域和ATP水解功能域可能参与抗性基因的表达调

控。

论文进一步通过同源比对确定了水稻编码的RH6、RH8和RH12同源基因。原生质

OsRH6OsRH8OsRH12Pbody

体瞬时表达显示、和蛋白在原生质体中成点状分布，且与

共定位。通过原核表达并纯化OsRH6-His融合蛋白及体外相分离实验，发现OsRH6具

有LLPS性质且其相变受温度影响。鉴定获得过量表达OsRH6-CFP转基因植株。细胞

学观察发现OsRH6在水稻细胞中无明显的点状分布，热胁迫会诱导点状分布形成。初

步实验发现细菌编码多肽flg22胁迫导致OsRH6、OsRH8和OsRH12的mRNA积累量

下降，预示着它们潜在的抗性功能。水稻条纹病毒接种实验发现，水稻条纹病毒侵染前

后，OsRH6、OsRH8和OsRH12以及Pbody特异基因的mRNA积累量无明显变化。

RNA6RH8RH12

综上所述，本文聚焦植物解旋酶、和相分离的调控机制及其在

I

拟南芥和水稻RH6/8/12响应病毒作用机制的初步研究

与病毒互作过程中的作用，从拟南芥及水稻两种模式生物中对RH6、RH8和RH12的相

变发生机制及其在病毒侵染过程中的功能进行了初步解析。结果发现RNA解旋酶RH12

的相变活性受其关键功能域的影响，且其相变可能参与调控植物抗性。另一方面，揭示

了RH6、RH8和RH12可能作为一种广谱的相变蛋白参与Pbody形成过程，进而调控

病毒的复制。通过该研究结果，拓展了对RNA解旋酶及无膜细胞器功能和对调控植物

与病毒之间互作机制理解，为未来开发抗病毒作物品种提供了一定的理论指导意义。

关键词：植物抗性，水稻，液液相分离，-RNA解旋酶，功能域

II