乙草胺降解菌和2-氯丙酸降解菌的鉴定与降解酶特性的初步研究.pdf

摘要

由于卤代有机物的使用日益增加，造成的环境污染成为农业和工业领域的一个关键

问题。基于该背景，本文以氯代酰胺类农药与卤代酸的生物降解为目标，从农田、海洋

环境中筛选并分离出高效菌株A-2-1与菌株W52，研究其降解特性及酶学特征，对于氯

乙酰胺类除草剂和卤代酸污染土壤或水体的修复具有理论指导意义和应用价值。

菌株A-2-1可降解乙草胺，根据生理生化特性及16SrDNA基因序列，进行同源分

析，鉴定为盐碱农杆菌（Agrobacteriumsalinitolerans）。该菌株能够以乙草胺为唯一碳源

和能源进行生长，可以耐受乙醇、甲醇、丙酮和乙腈。单一因素实验表明，A-2-1生长

菌株降解乙草胺的最适条件为：温度30℃、pH8.0，在此条件下，菌株5d内可降解60%

以上的乙草胺（初始浓度为80mg/L）。A-2-1生长菌株可耐受的最高乙草胺浓度为175

mg/L，辅助碳源的添加和乙草胺浓度的升高均会减弱其降解能力。菌株A-2-1对丙草胺

亦具有降解活性，与乙草胺相比，7d时降解率减少了1%；不能降解异丙甲草胺和丁草

胺。菌株A-2-1静息细胞降解乙草胺的最适温度与pH分别为30℃与9.0，在此条件下，

静息细胞（浓度4×108CFU/mL）在7d内可降解90%以上的乙草胺（初始浓度为80

mg/L）。虽然静息细胞对乙草胺的降解率随底物浓度的增加而下降，但当乙草胺浓度为

200mg/L时，静息细胞仍呈现较高降解能力。菌株A-2-1静息细胞对丙草胺、丁草胺和

异丙甲草胺亦具有降解活性，与乙草胺相比，7d时降解率分别减少了15.3%、45.2%和

51.5%。进一步考察粗酶液的降解特性，结果表明，菌株A-2-1中对氯乙酰胺类除草剂

有降解作用的酶为胞内酶，最适反应温度为30℃，随着温度升高，活性迅速降低，当温

度低于30℃时，酶相对稳定，可保留90%以上活性；最适反应pH为8.0，当pH6.0及

pH9.0时，酶活性降低，pH为6.0～9.0时，酶较稳定，相对酶活均在70%以上。该酶

可催化多种氯乙酰胺类除草剂降解，与3d可将80mg/L乙草胺完全降解相比，对丙草

胺和异丙甲草胺的降解率分别减少了22.9%和33.2%，不能降解丁草胺，且对该类除草

剂的降解能力高于生长菌株和静息细胞。

菌株W52可降解2-氯丙酸，根据生理生化特性及16SrDNA基因序列同源性分析，

鉴定其种属为昆明假单胞菌（Pseudomonaskunmingensis）。菌株W52能够耐受甲醇、乙

醇、丙酮和乙腈。以卤代乙酸、卤代丙酸、卤代丁酸与卤代酰胺等15种卤代物作为唯

一碳源考察菌株W52的生长特性与降解能力及其静息细胞降解特性，结果表明：该菌

株能够以除2-氟丙酸和卤代酰胺以外的11种卤代酸作为唯一碳源生长；对二氯乙酸、

单溴乙酸和2-溴丙酸的降解能力较高，108h内可将其完全降解（初始浓度为20

mmol/L）。菌株W52静息细胞对高浓度（30mmol/L）二氯乙酸、2-溴-2-甲基丙酸、单

溴乙酸、2-溴丁酸、2-溴丙酸和3-氯丙酸均表现出较高的降解能力，且静息细胞对卤代

酸的降解能力和耐受浓度均明显优于生长菌株。进一步考察粗酶液降解特性，结果表明，

该酶液可以催化多种卤代物脱卤，对单溴乙酸、单碘乙酸、2-氯丙酸和2-溴丙酸脱卤效

果较好，其催化D-2-氯丙酸和L-2-氯丙酸脱氯的最适温度和pH均为40℃和9.0；酶在

0～40℃，pH为5.0～9.0范围内均具有良好的稳定性。分析菌株W52全基因组发现，

其由一个不含质粒的环状染色体构成，序列总长为4435359bp，共有4093个蛋白编码

基因，在NR、COG、KEGG、Swiss-Prot和GO数据库中分别有4055、3779、2445、

3129和3157个基因得到注释，在以上各数据库中，预测可能参与卤代酸降解的基因分

别有4、1、2、4和1个。

综上所述，A-2-1生长菌株、静息细胞和胞内粗酶液降解乙草胺的最适温度均为

30℃，最适pH分别为8.0、9.0和8.0，对氯乙酰胺除草剂的降解效率随着N-烷基侧链

长短的变化而呈现差异；三者对氯乙酰胺除草剂的降解能力和耐受能力从大到小均为：

粗酶液静息细胞生长菌株。W52