植物器官培养.ppt

一、概念和意义1.茎尖培养概念茎尖分生组织培养指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。特点：可获脱病毒苗，操作困难，成苗时间长。普通茎尖培养对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。第二节茎尖培养第6页,共37页，星期六，2024年，5月茎段茎尖取材有限，可采用带芽或不带芽的茎段进行培养。优点容易成功、变异小、性状一致、繁殖速度快。用于快速繁殖。第7页,共37页，星期六，2024年，5月茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见，可快速繁殖无性系；培养脱病毒苗、品种改良；基础研究。2.茎尖培养意义蜡梅——茎段第8页,共37页，星期六，2024年，5月（一）建立无菌材料健壮枝梢去除叶片分成1-2cm自来水冲洗消毒75%的酒精30秒0.1%升汞或2%次氯酸钠消毒8-10min无菌水修剪剥离茎尖，通常切割下顶端通常切割下顶端0.1mm叶原基的茎尖无菌水接种。二、茎尖培养一般方法（茎尖分生组织）第9页,共37页，星期六，2024年，5月（二）培养基多为MS培养基及其改良配方，还有White配方、B5配方、Heller配方、Gautheret配方等。第10页,共37页，星期六，2024年，5月1.固体培养法特点琼脂做凝固剂，茎尖基部紧贴培养基。优点操作较为简单，普遍。缺点对有些植物培养较难。操作培养基分装——灭菌——冷却——茎尖接种——25±3℃培养。（三）培养方法第11页,共37页，星期六，2024年，5月2.纸桥培养法滤纸取代琼脂，液体培养基。优点营养物质能均衡持久地供给外植体，利于外植体健康生长。缺点操作复杂。第12页,共37页，星期六，2024年，5月茎尖培养可进行植物的无性快繁，并且技术较为成熟，也叫微繁技术。三、普通茎尖培养与繁殖技术第13页,共37页，星期六，2024年，5月（一）茎尖微繁技术的一般方法1.无菌培养体系的建立外植体制备正在生长的芽或腋芽、茎段、鳞茎切块、块茎、球茎。茎尖组织大小为带2-4个叶原基或更多。操作程序类似一般无菌操作基本技术，基本培养基：MS、B5、White等，糖2-3%，生长调节剂。培养条件1000-3000Lx、16hr、25℃。第14页,共37页，星期六，2024年，5月茎尖的发育方向及调节是采用生长调节剂，6-BA、KT等促进发芽，IBA、NAA、2,4-D促生根。培养的茎尖可能有几种不同的发育方向(1)腋芽萌发(2)脱分化后产生胚状体(3)脱分化后直接产生不定器官(4)脱分化后形成愈伤组织用作悬浮培养细胞或原生质体的起始材料，或用以分化大量胚状体，或不定芽.2.脱分化和再分化第15页,共37页，星期六，2024年，5月3.生根成苗胚状体可直接成苗，腋芽和不定芽须转入生根培养基培养。矿质元素高利于茎叶生长，低利于生根，故生根培养基中无机盐低。芽苗生根采取的措施(1)降低基本培养基无机盐浓度一般采用1/2MS或改良White基本培养基。(2)调节生长素浓度采用IBA或NAA0.1-0.5mg/L有利于分化根。(3)添加吸附剂如活性碳。(4)减少琼脂用量。第16页,共37页，星期六，2024年，5月试管苗的移栽应在生根后不久，当小根尚未停止生长之前及时移栽。（小根5cm左右）。即将形成的小植株转移到土壤的过程。这个过程是微繁殖最关键的一步。⑴保持小苗水分供需平衡⑵选择适当的介质珍珠岩、蛭石、粗砂、炉灰渣、锯木屑等。⑶防止杂菌滋生保持环境干净，农药灭菌。⑷注意光温管理避免阳光直射、温度适宜。4.试管苗的移植第17页,共37页，星期六，2024年，5月(二)影响茎尖培养微繁殖的因素基因型外植体的大小供试植株的生理状态芽在植株上的部位供试植株的年龄培养基：植物生长物质褐变玻璃化玻璃化苗的叶和嫩梢呈水晶透明或半透明水渍状；整株矮化肿胀