蛋白质的测定课件课件.ppt

杜马斯法（燃烧法）样品在高温下（700-800℃）燃烧，释放的氮气由带热导检测器（TCD)的气相色谱仪测定。测得的含氮量转换成样品中的蛋白质含量。第23页，共36页，星期日，2025年，2月5日几种蛋白质测定方法比较凯式定氮法双缩脲杜马斯福林-酚原理装置溶剂时间灵敏度干扰总氮量蛋白氮总氮量蛋白氮凯式定氮装置分光光度计高温装置、GC分光光度计浓硫酸用量较少不需要福林-酚试剂长简单快速3min简单快速较低低高高较小有干扰较小酸类及柠檬酸类第24页，共36页，星期日，2025年，2月5日其他方法染色法紫外吸收法水杨酸比色法第25页，共36页，星期日，2025年，2月5日采用凯氏定氮法测一样品的粗蛋白含量，根据下列记录的数据计算：

水份含量=8.0%，1号样品重量=1.015g，2号样品重量=1.025g，用于滴定的标准HCl浓度=0.1142mol/L，1号样品所用的HCl溶液的毫升数=22.0mL，2号样品的HCl溶液的毫升数=22.5mL，空白的HCl溶液的毫升数=0.2mL，分别以样品的干基和湿基计算粗蛋白质含量，假定该蛋白质含有17.5%的氮。第26页，共36页，星期日，2025年，2月5日第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日第一节概述?1.蛋白质的元素组成（Theelementsofprotein）C：50-55%N：15-18%O：20-23%H：6-8%S：0-4%微量元素：P、Fe、Zn、Cu2、基本结构单位：氨基酸3、蛋白质的变性作用。第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日4、蛋白质分析的重要性生物活性测定功能性质调查营养标签总蛋白质含量氨基酸组成蛋白质的营养价值第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日5、蛋白质的测定方法利用蛋白质共性的方法利用特定氨基酸残基法凯氏定氮法杜马斯法福林酚法染色法第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日第二节蛋白质的定性测定一、蛋白质的一般显色反应电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变色。书中列举了5种染料。二、复合蛋白质的显色反应（一）糖蛋白的显色（3种方法）（二）脂蛋白的显色（2种方法）第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日第三节蛋白质的定量测定关于氮-蛋白质换算等数?6.25=6.25=6.38=5.95第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日一、凯氏定氮法常量凯氏定氮法1.原理样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定①消化(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O1加硫酸钾作为增温剂，提高溶液沸点2加硫酸铜作为催化剂、消化终点指示剂3加氧化剂加速有机物氧化速度第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日②蒸馏NH4++OH-==NH3+H2O第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日影响氨化完全和速度的因素（1）K氏烧瓶和取样量（2）分解剂1g样品???K2SO4：?H2SO4=7g:12ml还有一种比例：?K2SO4：H2SO4=10g:20ml第11页，共36页，星期日，2025年，2月5日1用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定指示剂：混合指示剂（甲基红—溴甲基酚绿）指示剂红色绿色红色（酸）（碱）（酸）③吸收与滴定反应式为：NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-H2BO3-+H+==H3BO32用过量的H2SO4或HCl标准溶液吸收，再用NaOH标准溶液滴定过剩的酸液。第12页，共36页，星期日，2025年，2月5日