第54讲 基因工程-备战2025年高考生物一轮复习精品课件（新高考通用）.pptx

第54讲基因工程的基本工具和基本操作程序一、重组DNA技术的基本工具二、基因工程的基本操作程序三、DNA的粗提取与鉴定

课标要求核心素养1．阐明基因工程的原理及技术(含PCR技术)。2．举例说明基因工程在农牧、食品及医药等行业的应用。3．概述蛋白质工程的原理及应用。4．实验：DNA的粗提取与鉴定。1.生命观念：举例说出植物基因工程、动物基因工程成果及其给人类带来的影响；说明基因的碱基排列顺序—蛋白质的结构—蛋白质功能的关系。2．科学思维：结合生产实例，举例说出基因工程的基本操作程序。3．社会责任：认同蛋白质工程的重要意义。

一、重组DNA技术的基本工具1.基因工程(重组DNA技术)概述基因分子水平基因重组赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品定向改造生物性状；克服远缘杂交不亲和障碍原理：操作对象：操作水平：结果：意义：转基因等技术操作技术：

DNA重组技术的基本工具(三种“分子工具”)工具酶准确切割DNA分子的”分子手术刀”将DNA片段再连接起来的”分子缝合针”将体外重组好的DNA分子导入受体细胞的”分子运输车”载体限制酶DNA连接酶剪切拼接导入表达一、重组DNA技术的基本工具2.重组DNA技术的基本工具

(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)2.重组DNA技术的基本工具来源：特点：结果：主要是从原核生物中分离纯化来的识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。②产生平末端①产生黏性末端黏性末端GCAATTTATACG5335GCTTAAAATTCG平末端CGCCGGGCGCGC一、重组DNA技术的基本工具[易错提醒]限制酶作用的化学键是磷酸二酯键，不是氢键；在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割2次此DNA分子，产生4个末端。

(2)DNA连接酶作用：类型：将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶只连接黏性末端缝合黏性末端和平末端（效率较低）来源：大肠杆菌作用：来源：作用：T4噬菌体一、重组DNA技术的基本工具2.重组DNA技术的基本工具

(3)载体环状双链DNA分子种类：特点：作用：质粒(常用载体)：将外源基因送入受体细胞,在受体细胞内对目的基因进行大量复制动植物病毒噬菌体①稳定存在并能自我复制，或整合到受体DNA上同步复制②有一个至多个限制酶切割位点③具有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选一、重组DNA技术的基本工具2.重组DNA技术的基本工具[易错提醒]与膜载体的区别：基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内，并利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。

项目种类作用部位作用结果图示限制酶DNA连接酶DNA聚合酶DNA(水解)酶解旋酶磷酸二酯键形成黏性末端或平末端磷酸二酯键连接DNA分子片段磷酸二酯键形成新DNA分子磷酸二酯键形成脱氧核苷酸碱基对间的氢键形成单链DNA分子与DNA相关的五种酶的比较

DNA连接酶DNA聚合酶相同作用实质化学本质不同点模板作用对象作用结果用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质 不需要需要DNA的一条链作模板形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制在两个DNA片段间形成磷酸二酯键将单个核苷酸连接到已有DNA片段，形成磷酸二酯键DNA连接酶和DNA聚合酶

如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SamⅠ。所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。(1)不破坏目的基因原则：(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：限制酶的选择原则

通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中PstⅠ；为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接（或为了保证目的基因和质粒发生定向连接）可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒。(3)确保出现相同黏性末端原则：限制酶的选择原则

(1)EcolⅠ是一种,其识别序列是,切割位点是与之间的键。切割结果产生的DNA片段末端形式为。(2)不同来源的DNA片段结合,在这里需要的酶应是连接酶,此酶的作用是在与之间形成键,而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是。情境分析限制酶-GAATTC-磷酸二脂键黏性末端E.coliDNAGA磷酸二脂键T4DNA连接酶右图为DNA分子的切割和连接过程GA

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