蛋白质的分离纯化.ppt

第23页，共42页，星期日，2025年，2月5日第24页，共42页，星期日，2025年，2月5日第25页，共42页，星期日，2025年，2月5日④高效液相层析（High-Performanceliquidchromatography,HPLC）P154和314也分为凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析等特点：固定相支持剂颗粒细采取高压，洗脱速度增大第26页，共42页，星期日，2025年，2月5日第27页，共42页，星期日，2025年，2月5日4电泳(Electrophoresis)在外电场存在下，利用蛋白质分子携带的净电荷不同以分离混合物ArneTiselius获1948年诺贝尔化学奖P307第28页，共42页，星期日，2025年，2月5日4.1凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶（蛋白质和多核苷酸）琼脂糖凝胶（核酸）第29页，共42页，星期日，2025年，2月5日电泳仪水平电泳槽垂直电泳槽第30页，共42页，星期日，2025年，2月5日聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）不连续：浓缩胶和分离胶电泳迁移率决定于所带的净电荷以及分子大小和形状等因素。+凝胶加样P309第31页，共42页，星期日，2025年，2月5日关于蛋白质的分离纯化第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的分离纯化透析和超过滤超速离心层析（色谱）(chromatography)电泳(electrophoresis)第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日1透析和超过滤P302第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日2超速离心P302第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日基本原理：层析由流动相和固定相组成样品作为流动相流过固定相各组分在两相中分布程度不同各成分迁移率不同分离3层析（色谱）（Chromatography）P148第5页，共42页，星期日，2025年，2月5日两相：固定相（静相）和流动相（动相）有效分配系数：第6页，共42页，星期日，2025年，2月5日层析按流动相：气相、液相色谱等；按操作形式不同：纸层析、薄层层析、柱层析等；按分离机制：凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、吸附层析等。第7页，共42页，星期日，2025年，2月5日3.1纸层析

（Filter-paperchromatography）相对迁移率P151第8页，共42页，星期日，2025年，2月5日3.2薄层层析

（Thin-layerchromatography）P152第9页，共42页，星期日，2025年，2月5日3.3柱层析第10页，共42页，星期日，2025年，2月5日①凝胶过滤层析(分子排阻层析、分子筛层析）（Gel-filtrationchromatography）根据蛋白质分子大小不同来分离纯化蛋白质的一种方法。P303第11页，共42页，星期日，2025年，2月5日介质：凝胶颗粒（多孔的网状结构）交联度或孔度（网孔大小）——凝胶的分级分离范围交联葡聚糖——SephadexG-50（1500-30000）琼脂糖——Sepharose或Bio-GelA聚丙烯酰胺——Bio-GelP第12页，共42页，星期日，2025年，2月5日原理：第13页，共42页，星期日，2025年，2月5日②离子交换层析

（Ion-exchangechromatography）根据蛋白质所带电荷的不同进行分离纯化。介质：离子交换树脂溶液中的离子与树脂上的带电基团进行交换反应；各种离子交换能力不同，与树脂结合的牢固程度就不同；在洗脱过程中，各种离子迁移率不同，达到分离的目的。P152和310第14页，共42页，星期日，2025年，2月5日第15页，共42页，星期日，2025年，2月5日第16页，共42页，星期日，2025年，2月5日第17页，共42页，星期日，2025年，2月5日第18页，共42页，星期日，2025年，2月5日茚三酮反应：生成紫色物质脯氨酸和羟脯氨酸生成黄色物质氨基酸的定性定量第19页，共42页，星期日，2025年，2月5日第20页，共42页，星期日，2025年，2月5日根据蛋白质与特异的配体相互作用来分离的。蛋白质＋配体蛋白质配体复合物③亲和层析

(Affinitychromato