蛋白质溶液的浓缩方法.ppt

*2.1透析袋吸附法透析袋吸附法在透析技术的基础上改良而来的。 传统的透析是基于分子质量大小的液相分离技术，它由透过半透膜的选择性扩散来实现。但是纯粹的透析主要用于除去小分子类的溶质，而要达到浓缩（即除去溶剂）的目的则费时较长。 透析袋吸附法是将透析液换成可以吸水的溶液或者固体吸附剂，这样可实现很好的浓缩作用。第20页，共37页，星期日，2025年，2月5日*2.1透析袋吸附法具体操作： 将蛋白质溶液加入到透析袋中（无透析袋可以用玻璃纸代替），结扎好后将PEG、蔗糖等吸附剂撒在透析袋外；或者把吸水剂配成30%-40%的溶液，将装有蛋白质溶液的透析袋放入吸附剂溶液中。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后重复利用。优缺点： 优点：该方法简单高效，操作过程中可以保持蛋白质不变性，吸附剂可回收利用。 缺点：蛋白质可能吸附在透析膜上，导致回收率低。操作过程需要低温。第21页，共37页，星期日，2025年，2月5日*2.2凝胶吸附法定义：凝胶是一种惰性多孔聚合物，孔径较小的凝胶具有很强的吸水性，适宜浓缩分子量在10000以上的蛋白质。 常用的凝胶有SephadexG系列以及Bio-GelP系列凝胶。具体操作：将干的凝胶加入到蛋白质溶液中吸收水分子和其他小分子，当凝胶完全膨胀后，用过滤或立信德方法除去凝胶，即可得到浓缩后的蛋白质溶液。注意事项：溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在凝胶表面会产生阳离子交换，影响蛋白质的回收率。第22页，共37页，星期日，2025年，2月5日*3.1原理3.2操作过程3.真空冷冻干燥法第23页，共37页，星期日，2025年，2月5日*3.1原理 冻干法是指将蛋白质溶液在低温下冻结，然后在真空条件下升华干燥，除去冰晶，待升华结束后再进行解吸干燥，除去部分结合水的干燥方法，最终达到浓缩蛋白质溶液的目的。第24页，共37页，星期日，2025年，2月5日*3.1原理蛋白冻干粉冷冻初级干燥二次干燥避光贮存冷冻速率会影响最终产品的质量。慢速冷冻，快速冷冻。80%的溶剂被除去，残留的溶剂以湿气的形式吸附在产品上。残留溶剂降低到足以抑制微生物生长或化学反应发生的水平，同时保持了冻干蛋白的活性和完整性。需要使用时，加蒸馏水或生理盐水制成悬浮液，即可恢复原状态。第25页，共37页，星期日，2025年，2月5日*3.2操作过程油面一定不能低于油镜的中线。严禁无油或低油位开启真空泵。第26页，共37页，星期日，2025年，2月5日关于蛋白质溶液的浓缩方法第1页，共37页，星期日，2025年，2月5日*蛋白质的种类第2页，共37页，星期日，2025年，2月5日*蛋白质的性质胶体性质蛋白质的分子量在1万-100万之间，直径在1-100nm之间，属于胶体粒子。蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为在蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如?NH3、?COO-、?OH-、?SH、?CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易在蛋白质颗粒外面形成—层水膜。两性解离和等电点蛋白质同氨基酸一样也是两性电解质，在一定的pH条件下，能解离为带电基团从而使蛋白质带电。蛋白质的变性第3页，共37页，星期日，2025年，2月5日*蛋白质溶液的浓缩方法蛋白质溶液的浓缩连接了蛋白质的提取和蛋白质的分离纯化，是获取高浓度或高活性蛋白质的重要步骤。浓缩目的：提高蛋白质浓度；减少样品体积；便于进一步纯化。常用的浓缩方法：沉淀法（蛋白质的沉淀性质）吸附法（吸水剂）冻干法（真空低温脱水）超滤法（分子量）第4页，共37页，星期日，2025年，2月5日*1.1盐析法1.2低温有机溶剂沉淀法1.3等电点沉淀法1.4生成盐复合物沉淀法1.沉淀法1.5选择变性沉淀法1.6非离子多聚物沉淀法第5页，共37页，星期日，2025年，2月5日*1.沉淀法沉淀法浓缩蛋白质溶液，指将蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象。沉淀法是比较传统的分离纯化蛋白质的方法，目前仍然广泛使用。一般常用的沉淀浓缩有硫酸铵沉淀法、（低温）有机溶剂沉淀法、丙酮沉淀法、免疫沉淀法、三氯醋酸沉淀法、聚乙二醇沉淀法等。第6页，共37页，星期日，2025年，2月5日*1.1盐析法定义：盐析一般指溶液中加入无机盐而使某种蛋白质溶解度降低而析出的过程。原理：高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，使溶液中自由水分子数减小，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。第7页，共37页，星期日，2025年，2