细胞生物学研究方法细胞生物学.ppt

植物组织培养第62页，共94页，星期日，2025年，2月5日植物原生质体培养第63页，共94页，星期日，2025年，2月5日(三)非细胞体系在细胞生物学研究中的作用非细胞体系(cell-freesystem):来源于细胞，而不具有完整的细胞结构，但包含了进行正常生物学反应所需的物质（如供能系统和酶反应体系等）组成的体系即为非细胞体系。近年来，人们利用这一体系探讨了许多细胞生命活动中的重要问题，如DNA复制，RNA转录，蛋白质合成，膜泡运输，细胞周期调控、核膜及染色质的组装、核质运输机制等。第64页，共94页，星期日，2025年，2月5日二、细胞工程(cellengineering)(一)细胞融合（cellfusion）P44概念:细胞杂交（cellhybridization）同核体（homokaryon）异核体（heterokaryon）诱导细胞融合的方法:生物方法:化学方法:物理方法:第65页，共94页，星期日，2025年，2月5日细胞融合第66页，共94页，星期日，2025年，2月5日（二）、单克隆抗体技术克隆（clone）：对细胞来说，克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。1.血清抗体:抗原免疫系统（B淋巴细胞）抗体（混合物,抗血清)2.单克隆抗体:单个B淋巴细胞抗体（单一物质)专一性B淋巴细胞：体外培养肿瘤细胞：体外培养杂交瘤细胞单克隆抗体第67页，共94页，星期日，2025年，2月5日培养上清中X抗体的检测克隆化培养单克隆杂交瘤细胞培养上清中X抗体的检测杂交瘤细胞可持续分泌单克隆抗体规模化培养获得大量单克隆抗体动物免疫细胞融合混合细胞的HAT筛选)分泌X抗体B淋巴细胞骨髓瘤细胞X抗原B淋巴细胞瘤的突变株培养数天后细胞死亡无限生长细胞分泌X抗体只有杂交瘤细胞可长期存活下来BALB/c杂交瘤技术操作流程图解第68页，共94页，星期日，2025年，2月5日接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞1.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性：B淋巴细胞(Blymphocytes)：杂交瘤技术与单克隆抗体第69页，共94页，星期日，2025年，2月5日骨髓瘤细胞(myelomacells):恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株——没有抗体分泌物。第70页，共94页，星期日，2025年，2月5日2.细胞融合技术：脾细胞(B淋巴细胞)骨髓瘤细胞杂交瘤细胞长命不分泌抗体分泌抗体短命分泌抗体长命K?hler和Milstein,19751984年Nobel医学奖第71页，共94页，星期日，2025年，2月5日3.杂交瘤细胞的筛选：脾细胞(B淋巴细胞)骨髓瘤细胞杂交瘤细胞脾细胞/?脾细胞骨髓瘤细胞/?骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞脾细胞筛选出不能长期存活不能长期存活第72页，共94页，星期日，2025年，2月5日H,次黄嘌呤;A,氨基喋呤;T,胸腺嘧啶DNA内源性途径(主要途径)谷氨酰胺or单磷酸尿苷酸二氢叶酸还原酶AHT外源性途径(旁路途径)(Hypoxanthineguzninephosphoribosyltransferase)次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)胸腺嘧啶激酶(TK)(Thymidinekinase)B淋巴细胞：HGPRT+，TK+骨髓瘤细胞：HGPRT-，TK-存活死亡外源性途径(旁路途径)HAT培养基筛选第73页，共94页，星期日，2025年，2月5日(二)细胞拆合概念:P44胞质体核体细胞拆合方法:化学方法:物理方法:(三)显微操作技术（micromanipulationtechnique）概念:p45显微操作装置——用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置应用：显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等第74页，共