2025新人教版高中生物选修三 1.2.2《微生物的选择培养和计数》 课件.pptxVIP

第一章发酵工程

第2节微生物的培养技术及应用

——微生物的选择培养和计数

人教版高中生物选择性必修三;

02微生物的选择培养

03微生物的数量测定;

自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，

要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释

涂布平板法很难实现。;

从社会中来

科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶

PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术

要求使用耐高温(93℃)的DNA聚合酶。美国黄石公园;

启示：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

耐热微生物

耐寒微生物

石油分解菌5

同理：适用实验室微生物的筛选。

人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和PH)等，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基;

类型;

选择培养基

+氨苄青霉素

没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰

怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?;

01选择培养基

尿素[CO(NH?)?]含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。

尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH?,再被转化为NO?、NH?+等被植物吸收。;

1.将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方

该如何设计?

在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。

2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?

除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普

通培养基基本相同。;

1.从物理性质来讲，两者属于固体培养基，判

断依据是添加了凝固剂琼脂该类培养基的主要用途为分离、鉴定、计数、保存

2.从用途上来讲，培养基二_属于选择培养基，目

的是为了获得能分解尿素的微生物。

3.两种培养基共有的培养基成分有：

碳源、氮源、无机盐、水

培养基一的主要碳源为牛肉膏，

主要氮源为_蛋白胨;

培养基二的碳源为葡萄糖,氮源为_尿素;

概念：将菌液进行一系列梯???稀释，然后将不同稀释度的菌液分别

涂布到固体培养基的表面，进行培养。

主要过程：A、梯度稀释菌液B、涂布平板

稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。;

①铲取土样，将样品装入纸袋中

1mL1mL1mL1mL1mL1mL

10g;

02微生物的选择培养稀释涂布平板法

(2)涂布平板1mL1mL1mL1mL

1×1031×10?1×10?1×1061×107;

微生物的选择培养稀释涂布平板法

(3)菌落培养

待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。;

按T工具;

1.稀释涂布平板法——间接计数法

2.显微镜直接计数法——直接计数法

1.稀释涂布平板法空白对照稀释105倍

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的

一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，选择30-300个菌落的平板进行计数；

计数原则：每个稀释度至少取3个平板取其平均值；

分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。;

水

当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。;

微生物的数量测定1.稀释涂布平板法

计算公式：每g样品中的菌落数=(C÷V)×M

C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)

M代表稀释倍数

例：甲同学做此实验在稀释倍数10?获得3个平板，菌落数分别是80、90、100,涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目?

(80+90+100)/3

0.1一×10?=9×107个;

优点：快速、直观

缺点：

①不能区分死菌和活菌→偏大

②不适于对运动细菌的计数。

③个体小的细菌在显微镜下难以观察。;

土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们?每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌?

利用以“尿素作为唯