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(一)肽鏈合成起始(翻譯起始)指mRNA和起始氨基醯-tRNA分別與核蛋白體結合而形成翻譯起始複合物(translationalinitiationcomplex)。原核、真核生物各種起始因數的生物功能1、原核生物翻譯起始複合物形成核蛋白體大小亞基分離;mRNA在小亞基定位結合;起始氨基醯-tRNA的結合;核蛋白體大亞基結合。1)30S起動複合物的形成:在起動因數的促進下,30S小亞基與mRNA的起動部位,起動tRNA(fmet-tRNAfmet),和GTP結合,形成複合體。2)70S起動前複合體的形成:IF3從30S起動複合體上脫落,50S大亞基與複合體結合,形成70S起動前複合體。3)70S起動複合體的形成:GTP被水解,IF1和IF2從複合物上脫落。此時,tRNAfmet的反密碼UAC與mRNA上的起動密碼AUG互補結合,tRNAfmet結合在核蛋白的給位(P位)。在起始密碼子AUG上游9-13個核苷酸處,有一段可與核糖體16SrRNA配對結合的、富含嘌呤的3-9個核苷酸的共同序列,一般為AGGA,此序列稱SD序列。它與核糖體小亞基內16SrRNA的3’端一段富含嘧啶的序列GAUCACCUCCUUA-OH(暫稱反SD序列)互補,形成氫鍵。使得結合於30S亞基上的起始tRNA能正確地定位於mRNA的起始密碼子AUG。真核生物中的mRNA具有帽子結構,已知需一種特殊的帽子結合蛋白(CBP)以識別此結構。S-D序列:mRNA上的AGGAGGU區域作為翻譯起始信號,被稱為Shine-Dalgarno順序或S.D序列。2、真核生物翻譯起始複合物形成核蛋白體大小亞基分離;起始氨基醯-tRNA結合;mRNA在核蛋白體小亞基就位;核蛋白體大亞基結合。met40S60SMetMet40S60SmRNAeIF-2B、eIF-3、eIF-6①elF-3②GDP+Pi各種elF釋放elF-5④ATPADP+PielF4E,elF4G,elF4A,elF4B,PAB③MetMet-tRNAiMet-elF-2-GTP真核生物翻譯起始複合物形成過程(二)肽鏈合成延長指根據mRNA密碼序列的指導,次序添加氨基酸從N端向C端延伸肽鏈,直到合成終止的過程。肽鏈延長在核蛋白體上連續性迴圈式進行,又稱為核蛋白體循環(ribosomalcycle),每次迴圈增加一個氨基酸,包括以下三步:進位(entrance)成肽(peptidebondformation)移位(translocation)延伸過程所需蛋白因數稱為延長因數(elongationfactor,EF)原核生物:EF-T(EF-Tu,EF-Ts)EF-G真核生物:EF-1、EF-2原核延長因數生物功能對應真核延長因數EF-Tu促進氨基醯-tRNA進入A位,結合分解GTPEF-1-αEF-Ts調節亞基EF-1-βγEFG有轉位酶活性,促進mRNA-肽醯-tRNA由A位前移到P位,促進卸載tRNA釋放EF-2肽鏈合成的延長因數又稱註冊(registration)1、進位指根據mRNA下一組遺傳密碼指導,使相應氨基醯-tRNA進入核蛋白體A位。延長因數EF-T催化進位(原核生物)TuTsGTPGDPAUG53TuTsGTP2、成肽是由轉肽酶(transpeptidase)催化的肽鍵形成過程。3、移位延長因數EF-G有轉位酶(translocase)活性,可結合並水解1分子GTP,促進核蛋白體向mRNA的3側移動。進位轉位成肽真核生物肽鏈合成的延長過程與原核基本相似,但有不同的反應體系和延長因數。另外,真核細胞核蛋白體沒有E位,轉位時卸載的tRNA直接從P位脫落。4、真核生物延長過程(三)肽鏈合成的終止當mRNA上終止密碼出現後,多肽鏈合成停止,肽鏈從肽醯-tRNA中釋出,mRNA、核蛋白體等分離,這些過程稱為肽鏈合成終止。終止相關的蛋白因數稱為釋放因數(releasefactor,RF)一是識別終止密碼,如RF-1特異識別UAA、UAG;而RF-2可識別UAA、UGA。二是誘導轉肽酶改變為酯酶活性,相當於催化肽醯基轉移到水分子-OH上,使肽鏈從核蛋白體上釋放。釋放因數的功能原核生物釋放因數:RF-1,RF-2,RF-3真核生物釋放因數:eRF肽鏈終止階段:核蛋白體沿mRNA鏈滑動,不斷使多肽鏈延長,直到終止信號進入受位。1.識別:RF識別終止密碼,進入核蛋白體的受位。?2.
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