糖的提取分离结构测定.ppt

关于糖的提取分离结构测定第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日一、提取

单糖、低聚糖及苷类化合物常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得到不同极性的化合物。多糖常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。植物体内苷常与水解酶共存，所以要杀酶或抑制酶的活性。第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日提取流程第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日二、分离1.季铵盐沉淀法与酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分离。常用季氨盐有十六烷基三甲胺溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可沉淀分离中性多糖。第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日2.分级沉淀或分级溶解法按比例由小到大的顺序向多糖溶液中加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，反复溶解与沉淀。为了多糖的稳定，一般在PH7时进行，酸性多糖在PH2-4时进行。第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日分级沉淀法得到的多糖，常含有较多的蛋白质，需将其去除方法：选择使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂（如酚、三氯醋酸、鞣质等）处理sevag法：（用氯仿:丁醇5:1混合）酶解法：（蛋白水解酶，常与sevag法合用）三氟三氯乙烷法三氯醋酸法蛋白质的去除第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.离子交换色谱常用交换剂为阳离子或阴离子交换纤维素。阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。中性多糖与硼酸络合后可增加酸性，可被阳离子交换纤维素吸附酸性基团多的吸附力强，对于线性分子，分子量大的比小的吸附力强，直链分子比支链分子易吸附。第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日4.凝胶柱色谱

分子筛原理，按照分子量的大小不同进行分离。常用葡聚糖凝胶（sephadexG）5.纤维素柱色谱（吸附＋分配）6.制备性区域电泳（分子大小、形状、电荷不同，在电场作用下的迁移速率不同）第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日第六节糖的核磁共振性质

第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日一、糖的1H-NMR性质

1.1H-NMR化学位移糖的端基质子信号在δ4.3~6.0甲基五碳糖的甲基信号在δ1.0左右糖上其余质子信号在δ3.2~4.2之间。第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日2.化学位移的应用根据糖的端基质子信号的个数和化学位移值可推测连有糖的个数、糖的种类。根据甲基质子信号的个数和化学位移值可推测甲基五碳糖的个数、糖的种类。第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.偶合常数质子的邻位偶合常数与二面角有关两面角90度J=0Hz；两面角0或180度J=6~8Hz；两面角60度J=2~4Hz第12页，共38页，星期日，2025年，2月5日当2-H为直立键时β-D-和α-L-型糖的1-H和2-H键为双直立键，φ=180，J=6~8Hz第13页，共38页，星期日，2025年，2月5日α-D-和β-L-型糖1-H为e键，2-H为a键，φ=60，J=2~4Hz第14页，共38页，星期日，2025年，2月5日如D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿洛糖的2-H均为直立键当其成α苷时，端基质子与2-H的J约为4Hz；当其成β苷时，端基质子与2-H的J约为8Hz。第15页，共38页，星期日，2025年，2月5日2-H为e键，1-H无论处于e键还是a键，与2-H的两面夹角均约60度，不能用J判断苷键构型。如D-甘露糖第16页，共38页，星期日，2025年，2月5日L-鼠李糖优势构象为1C式，2-H为平伏键，1-H与2-H的两面夹角约60度，所以苷键的构型不能J来判断。第17页，共38页，星期日，2025年，2月5日二、糖的13C-NMR性质

1.化学位移CH3~18ppm甲基五碳糖的C6CH2OH~62ppmC5或C6CHOH68~85ppm糖氧环上的C2~C4-O-CH-O-95~105ppm端基C1或C2环上的碳，带有a-OH的较带有e-OH的出现