植物组织培养的基本技术.pptVIP

以MS培养基为例—铁盐与有机物母液配制母液化合物名称培养基用量（mg/L）扩大倍数称取量(mg)母液体积(mL)1L培养基吸取母液量（mL）铁盐Na2-EDTAFeSO4·7H2O37.327.810037302780100010有机物甘氨酸VB1VB6烟酸肌醇2.00.10.50.510010201551,00010010将配制好的母液按顺序排列，先取适量的蒸馏水放入容器，然后依次用专用的移液管按需要量吸取各种母液，并混合在一起。再将琼脂（事先加热溶解）和糖加入其中，最后加蒸馏水定容至所需体积。随即用0.lmol/l的NaOH和HCl将pH调至所需的数值，然后分装到培养瓶中。01培养基的pH大多数植物都要求在pH5.6～5.802培养基的制做方法计算：制做3LMS+6-BA2mg/l+NAA0.1mg/l+蔗糖3%+琼脂0.6%需要母液各多少？大量元素母液（10倍）——？微量元素母液（100倍）——？铁盐母液（100倍）——？有机物质母液（100倍）——？6-BA母液(1mg/ml)——？NAA母液(0.1mg/ml)——？蔗糖——？琼脂——？培养基的灭菌培养基一般采用湿热灭菌法，温度为121℃-123℃，维持20min，即可达到灭菌的目的。若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。但时间过短，不能保证灭菌的效果，易引起培养基污染。培养基储藏在4～10℃的条件下。培养基蒸气灭菌所需的最少时间容积/容器（ml）在121℃下所需要灭菌时间20~5015min7520min250~50025min100030min150035min200040min去掉皮和芽后，加水煮30min，再经过过滤，取其滤液使用。01用量为150-200g／L。02对pH值缓冲作用也大。添加后可得到健壮的植株。03马铃薯(potato)为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸（含有约20种氨基酸的混合物）01使用浓度为100-200mg／L。受酸和酶的作用易分解。02水解酪蛋白或水解乳蛋白01.酵母提取液(YE)(0.01％-0.05％)，主要成分为氨基酸和维生素类；02.麦芽提取液(0．01％-0．5％)03.苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。其他抗生物质抗氧化物活性炭6)其它辅助性物质01A、抗生物质(antibiotic)02种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等03用量：5-20mg／L。04作用：防止菌类污染，减少培养中材料的损失。对于刚感染的组织材料，可向培养基中注入5％-10％的抗菌素。05注意：抗生素各有其抑菌谱，要加以选择试用，也可两种抗生素混用。但是应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，使用要慎重。B、抗氧化物(antioxide)酚污染——植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒，使培养的材料生长停顿，失去分化能力，最终变褐死亡。在木本，尤其是热带木本及少数草本植物中较为严重。03方法：洗涤刚切割的外植体表面或过滤灭菌后加入固体培养基的表层。02用量：50-200mg／L的浓度01抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc04其他抗氧化剂：二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯C、活性炭主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。但活性炭对物质吸附无选择性、既吸有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%--5%。返010201植物激素是指自然状态下植物体内合成，并从产生处运送到别处，对生长发育产生显著作用的微量（1毫克/升以下）有机物；02植物生长调节剂是指一些具有植物激素活性的人工合成的物质。7、植物生长调节物质植物激素植物生长调节剂在植物组织培养中使用的生长调节物质主要有生长素类和细胞分裂素类两大类，少数培养基中还添加赤霉素GA3等植物生长调节物质种类IAANAAIBA2,4－D作用诱导愈伤组织形成和根分化，促进细胞分裂和伸长生长。根对生长素最敏感，在