仪器分析课件第9章高效毛细管电泳分析.pptVIP

*所以，带电离子在溶液中的迁移速度：物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。淌度μ：单位电场强度下的平均电泳速度。被分离组分的保留时间t为：μe：电泳迁移率（电泳淌度,单位：cm2·V-1·s-1），E：电场强度，V：电压；L：毛细管长度（有效长度为l）。Q为离子所带的静电荷,f为stokes阻力系数*对于球形离子：f=6πηrRs—离子的表观液态动力学半径；η—介质的粘度；从上式可见，当毛细管长度一定时，带电离子的迁移速度与溶质离子的电荷、施加的电压、缓冲液黏度及带电离子的大小有关。电渗流是驱动离子运动的第二种作用力。*双电层与电渗流石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，形成电渗流，速度ν电渗流。*1.HPCE中电渗流的大小与方向电渗流的大小用电渗流速度?eo表示，取决于电渗流迁移速度μeo和电场强度E。即：?eo=μeoE电渗流迁移速度μeo取决于电泳介质及双电层的Zeta电位?，即：l—毛细管有效长度；teo—电渗流标记物（中性物质）的迁移时间。?为溶剂的介电常数；?为双电层的Zeta电位。实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算*HPCE中电渗流的方向电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质：内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极；石英毛细管：内表面带负电荷，电渗流流向阴极。改变电渗流方向的方法：（1）毛细管改性表面键合阳离子基团。（2）加电渗流反转剂内充液中加入大量的阳离子表面活性剂，将使石英毛细管壁带正电荷，溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。*2.HPCE中电渗流的流形电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小），应避免毛细管两端出现高度差而改变流形，降低分离效率；液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。*3.HPCE中电渗流的作用电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍；各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：?+=?e+?eo阳离子运动方向与电渗流一致；?-=?e-?eo阴离子运动方向与电渗流相反；ν0=ν?eo中性粒子运动方向与电渗流一致；（1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离；（2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速；（3）电渗流的微小变化影响结果的重现性；在HPCE中，控制电渗流非常重要。*4.HPCE中影响电渗流的因素(1)电场强度的影响电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。(2)毛细管材料的影响不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同。*(3)电解质溶液性质的影响（a）溶液pH的影响对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大；pH3，完全被氢离子中和，表面电中性，电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。（b）阴离子的影响在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同。缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液粘度和工作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加，电渗流下降。**(4)温度的影响毛细管内温度的升高，使溶液的粘度下降，电渗流增大。温度变化来自于“焦耳热”。焦耳热：毛细管溶液中有电流通过时，产生的热量；HPCE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电场强度成正比。温度每变化1?C，将引起背景电解质溶液粘度变化2%～3%。*(5)添加剂的影响（a）加入浓度较大的中性盐，如K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液的黏度增大，电渗流减小。（b）加入表面活性剂，可改变电渗流的大小和方向。加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。加入