高效液相色谱的基础知识.ppt

关于高效液相色谱的基础知识第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法的特点高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法的特点1．高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达103cm·min-1.例如对氨基酸分离，用经典色谱法，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法的特点2．高效液相色谱法与气相色谱法（l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法的特点分析速度快——通常分析一个样品在15~30min，有些样品甚至在5min内即可完成。选择性高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，可分析同类型的有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体。灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法的特点超高效液相色谱(UPLC)—是区别于HPLC的液相色谱新领域—基于小颗粒填料和LC原理的一种创新技术—实现超高分离度、灵敏度、分析速度第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日1高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪工作原理?高压输液系统?进样系统?分离系统?检测系统第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪工作原理其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪工作原理1．高压输液系统由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪工作原理2．进样装置第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪工作原理3分离系统——色谱