《高效液相色谱》课件.pptVIP

高效液相色谱（HPLC）技术探索

液相色谱技术发展简史早期探索19世纪末，俄国植物学家茨维特利用碳酸钙柱分离叶绿素，开创了色谱技术的先河。这一早期技术被称作柱色谱，为现代色谱技术发展奠定了基础。液相色谱的革新20世纪50年代，气相色谱技术问世，液相色谱技术发展相对缓慢。直到60年代，高效液相色谱（HPLC）技术出现，以其高分辨率、高灵敏度和适用范围广等优势，迅速成为现代分析化学的领军技术。HPLC技术的应用

色谱分析的基本原理样品分离色谱分析是利用不同物质在固定相和流动相中分配系数的不同，使混合物中各组分在色谱柱中得到分离的技术。固定相与流动相色谱法中，固定相是指填充在色谱柱中的物质，可以是固体或液体。流动相是指通过色谱柱的液体或气体，它携带样品组分穿过色谱柱。分配系数

高效液相色谱的定义

HPLC与传统液相色谱的区别高压输送HPLC采用高压泵输送流动相，可以克服传统液相色谱中流动相压力低、分离效率低的缺点，提高分离效率。小粒径填料HPLC采用小粒径填料，可以提高色谱柱的理论塔板数，增强分离能力，提高分离效率。灵敏检测器

高效液相色谱仪器构造高压泵高压泵是HPLC的核心部件，负责将流动相以高压输送至色谱柱，保证流动相在色谱柱中顺利流动，并提供足够的压力，以实现高效分离。进样系统进样系统负责将样品注入流动相，并将其送入色谱柱进行分离。常见的进样系统包括自动进样器和手动进样器。色谱柱色谱柱是HPLC分离的核心，它装填着固定相，不同组分在固定相和流动相中分配系数不同，从而实现分离。检测器

高压泵系统详解泵体泵体是高压泵的核心，负责提供输送流动相的动力，它一般由一个或多个活塞组成，通过活塞的往复运动，将流动相推入色谱柱。脉冲阻尼器脉冲阻尼器用于减小活塞往复运动产生的压力波动，保证流动相的稳定性，提高分离效果。流量控制系统

进样系统工作原理进样阀进样阀是进样系统中的关键部件，它将样品注入流动相，并将其送入色谱柱。进样循环进样循环是指样品通过进样阀进入流动相，然后被流动相带入色谱柱的过程，进样循环的效率直接影响色谱分析的准确性。自动进样器

色谱柱选择与设计填料类型色谱柱填料的类型是选择色谱柱的关键因素，它决定了色谱分离的效果，常用的填料类型包括硅胶、聚合物、氧化铝等。粒径选择填料粒径越小，色谱柱的理论塔板数越高，分离能力越强，但流动相阻力也越大。因此，需要根据实际分析要求选择合适的粒径。柱长选择色谱柱的长度也影响分离效果，柱长越长，分离效果越好，但分析时间也越长。因此，需要根据实际分析要求选择合适的柱长。柱内径选择

检测器类型介绍紫外-可见光检测器紫外-可见光检测器是HPLC中最常用的检测器，它利用物质对特定波长紫外-可见光的吸收来检测物质的存在和浓度。荧光检测器荧光检测器用于检测具有荧光性质的物质，它利用物质在特定波长光照射下发出的荧光来检测物质的存在和浓度。电化学检测器电化学检测器用于检测具有电化学活性物质，它利用物质在电极表面发生的氧化还原反应来检测物质的存在和浓度。质谱检测器

流动相的选择与配制流动相性质流动相的选择取决于样品的性质和色谱分离模式，流动相应具有良好的溶解性、挥发性、稳定性和低粘度等性质。溶剂选择常用的流动相溶剂包括水、甲醇、乙腈、二氯甲烷等，选择合适的溶剂可以提高分离效率和检测灵敏度。流动相配制

正相色谱模式

反相色谱模式

离子交换色谱模式

亲和色谱模式

色谱分离机理吸附作用吸附作用是指样品组分在固定相表面被吸附，吸附作用越强，该组分在固定相中停留时间越长，反之则在流动相中停留时间越短。分配作用分配作用是指样品组分在固定相和流动相之间分配，分配系数越大，该组分在固定相中停留时间越长，反之则在流动相中停留时间越短。离子交换作用离子交换作用是指样品组分中的离子与固定相上的离子发生交换作用，交换作用越强，该组分在固定相中停留时间越长，反之则在流动相中停留时间越短。亲和作用

保留时间与保留因子保留时间保留时间是指样品组分从进样到被检测器检测到的时间，它反映了该组分在色谱柱中停留的时间。保留因子

理论板高度概念

选择性与分离度选择性选择性是指色谱柱对不同组分的区分能力，选择性越高，分离效果越好。分离度

分辨率计算

色谱峰形状分析峰高峰高是指色谱峰的最高点到基线的距离，它反映了组分的浓度。峰宽峰宽是指色谱峰的基线宽度，它反映了组分的扩散程度。峰面积峰面积是指色谱峰的面积，它反映了组分的总量。峰形

样品前处理技术

样品提取方法溶剂提取法溶剂提取法是指用适当的溶剂将样品中的目标物质溶解出来，常用的溶剂包括甲醇、乙腈、二氯甲烷等。超声波提取法超声波提取法是指利用超声波的能量，使样品中的目标物质从样品基质中分离出来，提高提取效率。微波提取法微波提取法是指利用微波的能量，使样品中的目标物质从样品基质中分离出来，提高提取效率，减少提取时间