微生物限度检查操作规程2015.pdf

微生物限度检查操作规程

1.目的

建立微生物限度检查操作规程，确保检查结果准确、可靠。

2.范围

本公司纯化水、产品的初始污染菌检查

3.职责

质量部QC

4.依据

2015版《中国药典》通则1105

GB/T19973.1-2005/ISO11737-1:1995

《医疗器械的灭菌微生物学方法第１部分：产品上微生物总数的估计》

GB15980—1995《一次性使用医疗用品卫生标准》

GB15979—2002《一次性使用卫生用品卫生标准》

5.内容

5.1.微生物限度检查环境

5.1.1.微生物限度检查应在不低于10000级背景下，局部100级的环境（同等级

别的超净工作台）下进行。

5.1.2.检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影

响供试品中微生物的检出。

5.1.3.对微生物限度检查实验室及超净工作台环境进行定期监测。

5.2.培养基、稀释液、缓冲液

5.2.1.胰酪大豆胨琼脂培养基：市售干粉培养基

5.2.2.沙式葡萄糖琼脂培养基：市售干粉培养基

5.2.3.R2A培养基：市售干粉培养基

5.2.4.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。

5.2.5.0.9%无菌氯化钠溶液。

5.3.培养基适用性检查

5.3.1.菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中心

获得的干菌种第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以证试验

菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]

枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

5.3.2.菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰

酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035℃培养18

24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡

萄糖琼脂培养基上，2025℃培养2~3天，上述培养后的新鲜培养物用

PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于

100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面

培养基上，2025℃培养57天，加人35ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯

80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%(ml/ml)聚山

梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每

lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小

时内使用；若保存在28℃在24h内使用。黑曲霉孢子悬液存在28℃，

在验证过的贮存期内用。

5.3.3.阴性对照：阴性对照应无菌生长。若阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。

5.3.4.培养基适用性检查：接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基

平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，胰酪大豆胨琼脂培养基平板置

30~35℃，培养不超过3天；沙氏葡萄糖培养基平板置20~25℃，培养不

超过5天。每一试验菌平行做2皿。同时，用相应的对照培养基代替被检

培养基进行上述试验。被检培养基和对照培养基上的菌落平均数的比值应

在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的一致。

5.3.5.R2AR2A培养基适用性检查同胰酪大豆胨琼脂培养基。试验菌种为铜绿假单胞试验菌种为铜绿假单胞

菌和枯草芽孢杆菌。

5.4.供试液制备

5.5.供试品检查

5.5.1.平皿法：平皿法包括倾注法和涂布法。每种培养基至少制备2个平皿。

5.5.1.1.倾注法：取制备的