3.2 基因工程的基本操作程序（第二课时）课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第三章基因工程第2节基因工程的基本操作程序

1、基因工程的基本操作程序（4个步骤）？2、如何获取目的基因？3、什么是PCR？PCR的条件、过程、结果分别是什么？复习回顾获取了足够量的目的基因后，可以直接把目的基因导入受体细胞吗？

就算可以进行转录和翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂进行复制，导致子代细胞不再含有目的基因游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解不能原因那怎样才能让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代呢？

本节聚焦本节聚焦基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？

活动一：请同学们自主阅读教材P80，小组合作思考讨论完成问题。1.基因表达载体的构建的目的？载体还需要哪些结构？各个元件有什么作用？2.目的基因插入什么位置？目的基因插入位点是随意的吗？3.请文字和箭头表示基因表达载体的构建过程。4.使用一种DNA限制酶进行切割，是否只会得到一种重组DNA？如果不能，怎么改进？二、基因表达载体的构建

使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代；使目的基因能够在受体细胞中表达和发挥作用。1目的：二、基因表达载体的构建

2组成：DNA复制的起始位点位于基因的上游；RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。位于基因的下游；终止转录便于重组DNA分子的筛选和鉴定。能控制表达所需要的特殊性状二、基因表达载体的构建

①用一定的限制酶切割载体，使其出现一个切口。②用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。③将切下的Bt基因片段拼接到载体的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子。载体基因表达载体3构建过程：二、基因表达载体的构建

启动子下游和终止子上游。因为只有插入在启动子和终止子之间，目的基因才可以正常表达。1.构建基因表达载体时目的基因插入的位置应该在哪里？为什么？活动二：思考问题,分析基因表达载体构建的目的和方法。二、基因表达载体的构建

2.请结合下图思考，使用哪种限制酶同时处理质粒、外源DNA可以正确构建基因表达载体？BamHⅠ和HindⅢ二、基因表达载体的构建

总结归纳1：限制酶的选择原则(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。二、基因表达载体的构建

(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：质粒作为载体必须具备标记基因，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。若载体上有两个及以上的标记基因，则可合理对其中一些标记基因进行酶切破坏，从而达到比1个标记基因更高的筛选成功率，防止只有1个标记基因时出现的“假阳性”(即未成功导入目的基因的载体也能正常表达标记基因，造成无效筛选)。二、基因表达载体的构建

(3)善用“双酶切”，注意方向性：目的基因所在序列和载体上存在多种酶切位点时，一般需要选择在目的基因所在序列和载体上都存在切割位点的两种不同的限制酶，对目的基因所在序列和载体进行剪切，即“双酶切法”。其优点和作用是：①防止目的基因环化；②避免目的基因与载体反向连接，即DNA连接酶连接后形成的重组DNA分子上，目的基因和载体启动子的方向(或描述为“RNA聚合酶的移动方向”)必须是相同的。否则目的基因导入后无法正常转录、表达。如图甲、乙也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。二、基因表达载体的构建

(4)巧用“同尾酶”：同尾酶指来源不同，但能产生相同黏性末端的限制酶。当不适合选择某种限制酶时，可用其同尾酶替换，以获得相同的黏性末端。二、基因表达载体的构建

总结归纳2：区分启动子和终止子与起始密码子和终止密码子名称启动子终止子起始密码子终止密码子化学成分DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻碱基mRNA上三个相邻碱基位置目的基因上游目的基因下游mRNA首端mRNA尾端作用RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA决定转录的结束翻译的起始信号决定翻译过程的结束二、基因表达载体的构建

启动子的类型根据启动子的转录模式，可分为：①组成型启动子能够调控基因的表达，使其基本恒定在一定程度上，从而使基因在不同部位或组织中的表达水平不存在明显差异。这类启动子一般来自管家基因，可连续不断地启动基因的表达。②组织特异性启动子其调控作用使得基因往往只在某些特定器官或组织中表达，且表现出发育调节的特性。其最大的优势是其启动的外源基因在受体中仅在需要的部位特异表达，克服了组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异、持续、高效表达所造成的浪费，增加了转基因的效果。③诱导型启动子当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。

1(2023·新课标，6)某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将