3.2基因工程的基本操作程序 课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

从社会中来1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？P77转基因抗虫棉与普通棉花

3.将目的基因导入受体细胞苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建4.目的基因的检测与鉴定

第3章基因工程

第2节基因工程的基本操作程序

高二生物组

1.利用PCR获取和扩增目的基因2.基因表达载体的构建过程本节主要解决的困惑

原核细胞基因的结构示意图真核细胞基因的结构示意图原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的连续不连续编码区非编码编码区：编码蛋白质的合成非编码区：不能编码蛋白质，调控遗传信息的表达包括：编码区上游编码区下游知识回顾1：基因的结构

原核细胞基因的结构示意图真核细胞基因的结构示意图启动子：RNA聚合酶结合位点，转录起始的信号终止子：终止RNA的合成外显子：内含子：能编码蛋白质的序列不能编码蛋白质的序列非编码序列=非编码区+内含子知识回顾1：基因的结构

知识回顾1：基因的结构

新合成的子链DNA聚合酶DNA聚合酶DNA解旋酶游离的脱氧核苷酸解旋需要细胞提供能量需要解旋酶的作用结果：氢键断裂，双链打开合成子链知识回顾2：DNA的复制过程

真核细胞与原核细胞中基因表达过程示意图知识回顾3：基因的表达

1转录时，DNA链完全解开吗？整个DNA都转录？转录不是转录整个DNA，是转录其中要表达的基因，以基因的一条链为模板，2不同基因的模版链是否相同？不同基因模板链不同3.同种生物的不同细胞中，由于基因的选择性表达，mRNA的种类和数量一般是不相同的，但tRNA和rRNA的种类一般没有差异。边解旋边转录点拨提升1

【思考1】：如果把一个真核生物的基因导入原核细胞中表达，一定会产生原来的蛋白质吗？成熟mRNA相应酶去除内含子转录翻译真核基因：编码区（外显子+内含子）多肽链前体mRNA蛋白质加工一般不能产生原来的蛋白质①原核生物细胞里没有相应的酶来去除内含子；②原核生物没有真核的蛋白质加工系统（如内质网、高尔基体等）深度思考

【思考2】:如果把真核基因导入原核细胞中表达，不考虑蛋白质加工的问题，如何产生与原来结构相同的蛋白质？去除内含子成熟mRNA转录真核基因：编码区（外显子+内含子）前体mRNA相应酶mRNA单链提取逆转录酶DNA单链DNA双链酶把真核基因的cDNA导入到原核细胞中表达。这种双链DNA是不含内含子的DNA，叫做cDNA深度思考

1.目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或得预期表达产物等的基因，主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。2.实例：与生物抗逆性相关的基因（Bt抗虫基因）与优良品质相关的基因与生物药物和保健品相关的基因（胰岛素、干扰素基因）与毒物降解相关的基因与工业用酶相关的基因等3.目的基因获取方法：（一）从基因文库中获取；（二）通过DNA合成仪直接合成；（三）利用PCR技术扩增；目的基因的筛选与获取

（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库概念：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。2.基因文库类型：（未知序列）基因组文库部分基因文库（包含一种生物的所有基因）（cDNA文库）（包含一种生物的一部分基因）某生物体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体限制酶与运载体连接导入基因组文库某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入部分基因文库（cDNA文库）

DNA合成仪基因比较小、核苷酸序列已知通过DNA合成仪用化学方法直接合成目的基因（二）人工合成目的基因（已知序列）1.前提：2.方法：

困惑点一：利用PCR获取和扩增目的基因PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。1.概念：DNA复制所需的基本条件参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶（体外用高温代替）打开DNA双链DNA两条母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链与两条母链结合的2种引物使DNA聚合酶能够从引物3′端连接脱氧核苷酸2.方式：3.条件：以指数方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）2n作用

（1）什么是引物？DNA复制时