高三生物二轮复习微专题：PCR技术中的引物课件.pptx

PCR技术中的引物生物二轮复习微专题

PCR实验原理介绍

近年部分高考试题中相关内容考察卷序试题试题分析考察引物课标要求2023年浙江卷考察基因编辑技术，属于情境题√1、阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及表达产物的检测鉴定等步骤2、教学提示：利用聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验2023年山东卷考察PCR技术，属于情景题√2023年湖北卷考察PCR技术，属于理解题2022年湖北卷考察PCR技术，属于材料分析题2022年福建卷考察基因工程，属于理解题√2021年全国卷考察PCR技术，属于识记题√2021年湖北卷考察PCR技术，属于情境题√考察PCR技术，属于材料分析题2020年北京卷√考察PCR技术的应用，属于情境题2020年江苏卷。。。。。。。。。。。。

PCR中的引物：别怕！我们一起来解决！！课标有要求，教材呈现有限，高考考察难度大，

教材中的引物

1、引物是：2、引物的作用：一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸使Taq酶能够从其3’端开始连接脱氧核苷酸一、引物的作用

例题1（2011年江苏卷）请回答基因工程方面的有关问题;PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_______________________________________________________________________________________________DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能将单个脱氧核苷酸连续结合至双链DNA片段的引物链上。

二、引物的设计

例题2(2021.湖北)某实验利用PCR技术获取目的基因,实验结果显示,除了目的基因条带(引物与模板完全配对)外,还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应中非特异条带的产生，以下措施中有效的是A.增加模板DNA的量B.延长热变性的时间C.延长延伸的时间D.提高复性的温度答案：D

1、一般而言，引物越长，G+C比例越高，退火温度越高，扩增特异性强。二、引物的设计

例题3（2011年江苏卷）请回答基因工程方面的有关问题∶设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的2组引物如图，都不合理，请分别说明理由。①第1组：______________;②第2组：_____________________。引物1和引物11局部发生碱基互补配对而失效引物1自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效

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2、引物自身不应存在互补配对序列（发夹结构）；两条引物之间不应存在互补配对序列。二、引物的设计

例题4（2019·江苏）（节选）图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tetr)和氨苄青霉素抗性基因（ampr）。请回答下列问题：（4）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段，原因是乙、丙选择了引物甲和乙并且目的基因反向连接

三、引物的应用1、通过选择合适的引物，确定目的基因的正确插入方向

原理是：用限制酶剪切该DNA，随后使用DNA连接酶将获得的酶切产物环化，这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状DNA分子。以该已知序列为模板设计一对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩增出未知序列。反向PCR如何扩增已知序列两端的未知序列呢？

②④?DNA序列(虚线