细胞凋亡的流式细胞术检测.ppt

关于细胞凋亡的流式细胞术检测第1页，共32页，星期日，2025年，2月5日1.1细胞凋亡细胞凋亡(Apoptosis)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。或者说在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自身的程序，自我结束生命的死亡方式。程序性细胞死亡(ProgrammedCellDeath,PCD)细胞凋亡同细胞分裂、细胞分化一样，是机体生存和发育离不开的最基本生物现象，通过凋亡可以平衡机体内细胞的数目，清除衰老、过剩、有害的细胞。

第2页，共32页，星期日，2025年，2月5日与细胞凋亡有关的疾病

第3页，共32页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡的形态特征凋亡的起始：微绒毛消失，细胞间接触消失，与周围细胞脱离，细胞质中线粒体大体完整，染色质固缩；细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面；凋亡小体的形成。核膜核仁破碎，核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围；凋亡小体逐渐被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。

第4页，共32页，星期日，2025年，2月5日第5页，共32页，星期日，2025年，2月5日是细胞受到严重损伤或大剂量细胞毒药物作用后出现的反应。早期表现为细胞膜破坏，线粒体肿胀。继而溶酶体破裂,细胞内容物流出,引起炎症。1.2细胞坏死第6页，共32页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡与细胞坏死的区别——————————————————————————————————————坏死凋亡1.性质2.诱导因素强烈刺激，随机发生较弱刺激，非随机发生3.生化特点4.形态变化6.DNA电泳5.炎症反应7.凋亡小体8.基因调控被动过程，无新蛋白合成，不耗能主动过程，有新蛋白合成，耗能细胞结构全面溶解、破坏、细胞肿胀胞膜及细胞器相对完整细胞皱缩，核固缩弥散性降解，电泳呈均一DNA片状DNA片段化（180-200bp），电泳呈“梯”状条带溶酶体破裂，局部炎症反应溶酶体相对完整，局部无炎症反应有病理性，非特异性生理性或病理性，特异性无有无第7页，共32页，星期日，2025年，2月5日2细胞凋亡的流式检测方法利用流式仪测定细胞光散射可对凋亡细胞进行分析凋亡早期细胞因体积减小，胞浆及染色质固缩，FSC变小，SSC增大凋亡晚期细胞FSC、SSC均变小坏死细胞则因细胞膜通透性改变，细胞肿胀，FSC、SSC变大，胞膜破裂，胞内含物释出后FSC、SSC均变小。第8页，共32页，星期日，2025年，2月5日2.1PI单染检测2.2AnnexinV/PI(7-AAD)双染检测2.3细胞内钙离子测定2.4线粒体膜电位检测2.5Caspases细胞酶的检测2.6DNA碎片分析：Apo-BrdU2.7凋亡相关蛋白：Fas、Bcl-2、P532细胞凋亡的流式检测方法第9页，共32页，星期日，2025年，2月5日与细胞周期相同，利用PI染色，通过检测DNA含量来同时判定细胞周期和凋亡。凋亡过程中，细胞内核酸酶释放，细胞DNA发生有序降解，被降解的低分子量DNA片段从变性细胞膜（经乙醇及透膜剂处理）漏出细胞外，使得凋亡细胞内的DNA含量减低，在流式细胞仪测定细胞DNA含量直方图中G0/G1峰前可出现亚二倍体峰，即凋亡峰通过峰下的面积值可得出凋亡细胞在所测细胞群中所占的比率。2.1PI单染检测第10页，共32页，星期日，2025年，2月5日第11页，共32页，星期日，2025年，2月5日PI单染色法的最大优点在于获得凋亡细胞百分数的同时可以与细胞周期中其他时相的细胞进行比较该法简便、标本制备容易、检测费用低缺点：PI单染色法无法确认来自哪一时相的凋亡，对于S期和G2/M期的细胞发生凋亡时，凋亡峰有时与G1峰或S峰相互重叠，导致G1峰或S峰增宽而无典型的sub-G1峰出现，所以无法分析来自S期或G2/M期细胞的凋亡，应借助其他方法进行检测第12页，共32页，星期日，2025年，2月5日磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine,PS）异位：正常情况下，PS位于细胞膜内层，细胞发生凋亡时PS从细胞膜内翻转并暴露在细胞膜外层，是细胞发生凋亡的早期事件。2.2AnnexinV/PI(7-AAD)双染检测第13页，共32页，星期日，2025年，2月5日AnnexinV选择性结