3.2基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3(1).pptx

3.2基因工程的基本操作程序

你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤呢？

培育转基因抗虫棉的四个步骤：与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉

（有抗虫特性）导入抗虫基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定

一、第一步：目的基因的筛选与获取（P76）1.目的基因⑴概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因。如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关基因。主要是编码特定蛋白质的基因，也可以是具有调控作用的因子。Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因Bt抗虫蛋白使棉花抗虫

一、第一步：目的基因的筛选与获取（P76）1.目的基因⑵实例：培育转基因抗虫棉用到的Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因。苏云金芽孢杆菌产生Bt基因伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白）表达破坏鳞翅目昆虫的消化系统杀死棉铃虫导入抗虫棉培育棉花细胞

一、第一步：目的基因的筛选与获取（P76）2.筛选合适的目的基因①从相关已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。②利用序列数据库和序列比对工具进行筛选。苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息。Bt蛋白分解为多肽后，与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，造成害虫死亡。Bt蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才表现出毒性，人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。Q：筛选出来的目的基因如何获取？

一、第一步：目的基因的筛选与获取（P76）3.获取目的基因的方法人工合成从基因文库中获取利用PCR获取和扩增目的基因

一、第一步：目的基因的筛选与获取（P76）3.获取目的基因的方法⑴人工合成目的基因①前提：基因比较小、核苷酸序列已知②方法：通过DNA合成仪用化学方法直接合成⑵从基因文库中获取将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成DNA合成仪

基因组文库部分基因文库（如cDNA文库）

生物材料人工合成获取目的基因DNAcDNA一定大小范围的DNAPCRmRNA基因组文库cDNA文库基因文库包括限制酶酶切逆转录导入受体菌中保存

一、第一步：目的基因的筛选与获取（P76）3.获取目的基因的方法⑶利用PCR获取和扩增目的基因①概念：PCR是聚合酶链式反应的缩写。是一项根据DNA半保留复制的原理，通过在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。（穆里斯）Q：PCR需要什么条件呢？先回顾DNA的复制过程！PCR扩增仪/PCR仪

参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶打开DNA双链DNA母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链ATP为合成DNA子链供能引物使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸体内DNA复制所需的基本条件Q：体外复制怎么改进？

参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶打开DNA双链DNA母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链ATP为合成DNA子链供能引物使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸体内DNA复制所需的基本条件体外用高温代替体外用耐高温的DNA聚合酶一般为DNA单链引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物长度通常为20?30个核苷酸。

3′5′DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有链的3′-端，即子链的延伸方向是5′→3′。由于DNA聚合酶不能将单个的核苷酸链连接成链，因此子链合成需要引物（最初的已有链）。DNA聚合酶3′5′模板链

DNA复制参与的组分PCR技术参与的组分在DNA复制中的作用DNA母链模板：2条DNA母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸原料：dNTP（4种脱氧核苷酸）合成DNA子链的原料能量：ATP能量：dNTP为合成DNA子链供能解旋酶解旋酶：体外用高温代替打开DNA双链DNA聚合酶DNA聚合酶：耐高温（Taq酶）催化合成DNA子链引物：2种小分子单链核酸片段使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸一定的缓冲液（Mg2＋）真核细胞和细菌的DNA聚合酶需要Mg2＋激活PCR技术所需的基本条件：

在PCR过程中实际加入的为dNTP（实质加入的是4种脱氧