生物化学检验技术职业教育医学检验技术专业教学27课件.pptx

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生物化学检验技术

光谱分析技术

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检验神器——分光光度计

1665年牛顿的发现

早在1665年牛顿作了一个实验：

他让光透过暗室窗上的小圆孔，在室内形成光束，该光束经棱镜色散后，在墙壁上呈现红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫的色带。

这色带就称为“光谱”。

光

棱镜

光谱

1665年牛顿的发现

我们对复色光分成单色光有了最初步最直接的认识。

约翰·朗伯，德国数学家、天文学家、物理学家

奥古斯特·比尔，德国物理学家、数学家

朗伯(Lambert)早在1760年就发现物质对光的吸收与物质的厚度成正比。

比尔(Beer)在1852年又发现物质对光的吸收与物质浓度成正比。

在应用中，人们把朗伯定律和比尔定律联合起来，又称之为朗伯—比耳定律。

根据Lambert-Beer定律，当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，吸光度与溶液层厚度和溶液浓度成正比。

入射光I0

透射光It

可见分光光度计的基本原理

在入射光波长、强度及溶液温度不变的情况下，溶液的吸光度A与溶液的厚度L成正比，与溶液的浓度C成正比。A=KLC。

式中，K——吸光系数;

c——溶液的浓度

L——液层的厚度（cm）

光源

单色器

吸收池

检测器

显示系统

可见分光光度计的基本结构

解读使用手册

1.打开电源开关，通电预热仪器20min。

2.将波长旋至测定的波长。

3.将黑室、空白液、标准液或待测液放入比色池。

4.黑室置于光路中时，调节T为0%，空白液置于光路中时，调节T为100%，重复调节三次。

5.切换置于A位，用消光调零调节A为0.0。

6.将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度(A)。重复测量三次，取三次吸光度值的平均值作为测定值。

7.仪器使用完毕，取出比色皿，将液体倒回原试管，复原仪器，关闭电源开关，拔下电源插头，登记使用记录。插入比色素材

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