CD19-CAR-T和CD19-CAR-CIK细胞对表达CD19+K562细胞株杀伤作用的比较.pdf

·28·中国优生与遗传杂志2017年第25卷第6期

CD19-CAR-T和CD19-CAR-CIK细胞对表达CD19+K562细胞

株杀伤作用的比较

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曹韪凡，羊轶驹，康立清，余宙，赵世民，俞磊，曹峰林，戴绍军

（1.东北林业大学；2.海南省三亚农垦医院；3.上海市华东师范大学化学与分子工程学院；4上海分子治疗与新药创制工程

技术研究中心；5.生物医学工程与技术研究所；6.哈医大附属第一医院）

摘要：目的CAR-CD19-CIK和CAR-CD19-T效应细胞在体外对表达CD19的K562稳定细胞株杀伤能力和杀伤特异性的

比较。方法效应细胞的构建是以通过基因合成和分子克隆手段构建CAR-CD19片段，以酶切的方法将CAR-CD19片段插入到

慢病毒载体上；分离获得同一个健康志愿者外周血单核细胞，一部分加IFN-γ、重组人IL-1α、CD3单克隆抗体、重组人

IL-2等细胞因子诱导CIK细胞产生；另一部分体外分选CD3阳性T细胞，CAR-19慢病毒同时感染CIK细胞和T细胞，采用流式细

胞术检测转导效率和细胞分型；CD19+的靶细胞是由装载CD19基因表达的慢病毒载体转导K562细胞系，通过抗菌素的压力选

择而构建；乳酸脱氢酶释放法（LDH）检测CAR-CIK细胞和CAR-T细胞对靶细胞的杀伤效率，炎性因子检测（CBA）法检测由

CAR-CIK细胞和CAR-T细胞的细胞因子的分泌水平。结果同一CD19-CAR慢病毒载体在相同转导条件下，对原代CIK细胞的

转导效率是60.5%，对原代T细胞的转导效率是36.2%；当效靶比5：1、10：1和20：1在这三种比例时，CAR-19-CIK细胞对

CD19-K562细胞的杀伤效率分别为14.65%、33.08%和42.5%，对K562细胞的杀伤效率分别为8.3%、10.1%和24.9%；而CAR-19

-T细胞对CD19-K562细胞的杀伤效率分别为17.22%、26.52%和32.49%，对k562细胞的杀伤效率分别为0.1%、3.6%和10.3%。

结论CAR-19-CIK细胞的杀伤作用明显强于CIK细胞；CAR-19-T细胞杀伤特异性比CAR-19-CIK细胞强。本研究对CAR-T和

CAR-CIK免疫细胞治疗血液肿瘤的新策略和新临床方案设计提供了有意义的实验数据。

关键词：过继性免疫疗法；嵌合抗原受体；CAR-T；CAR-CIK

中图分类号：R730.51文献标识码：A文章编号：1006-9534（2017）06-0028-05

DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2017.06.011

ComparingthecytotoxicityandspecificityofCAR-19-CIKandCAR-19-TeffectorcellsinvitroagainstK562cell

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lineexpressingCD19.CAOWei-fan，YANGYi-ju，KANGLi-qing，YUZhou，ZHAOShi-min，YULei，CAOFeng-

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lin，DAIShao-jun.（1.NortheastForestryUniversity；2.EastChinaNormalUniversity，CollegeofChemistryandMolecular

Engineering；3.Shanghai，EastChinaNor