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*验十六紫外吸收法测定核酸含量验原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C一），能够强烈吸收250~280nm波长的紫外光。核酸（DNA，RNA）的最大紫外吸收值在260nm处。在此波长处，核酸溶液的吸光率与其含量成正比关系，可用于定量测定。验原理采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm波长下，浓度为1μg/mL的DNA溶液其光密度为0.020，而浓度为1μg/mL的RNA溶液其光密度为0.024。因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。该法简单、快速、灵敏度高。试剂和器材1．试材：核酸样品DNA或RNA
2．主要仪器：
（1）分析天平（2）紫外分光光度计
（3）冰浴或冰箱?
（4）离心机?
（5）离心管（10mL）?
（6）烧杯（10mL）?
（7）容量瓶（50mL、100mL）?
（8）移液管（0.5ml、2mL和5mL）
（9）药品勺和玻璃棒?
（10）试管和试管架。
3．试剂：
（1）5%~6%氨水：用25%~30％氨水稀释5倍。?
（2）钼酸铵-过氯酸试剂：取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水中。准确称取待测核酸样品0.5g，加少量0.01mol/LNaOH调成糊状,再加适量水，用5-6%氨水调至pH7.0，定容至50mL。取两支离心管，甲管加入2mL样品溶液和2mL蒸馏水，乙管加入2mL样品溶液和2mL沉淀剂。混匀，在冰浴上放置30min。在3000r/min下离心10min。从甲、乙两管中分别吸取0.5mL上清液，用蒸馏水定容至50mL。选择厚度为1cm的石英比色杯，在260nm波长处测定A值。123测定A280的值。求出A260/A280.判断RNA的纯度。RNA=A260/A280=2.04操作方法二、计算公式二、计算公式ΔA260RNA浓度=xN0.024xL式中，ΔA260为甲管稀释液在260nm波长处A值减去乙管稀释液在260nm波长处A值；L──比色杯的厚度，1cm；N——为稀释倍数；0.024──每毫升溶液内含1μgRNA的A值；1mL待测样品液中核酸（微克）核酸％＝1mL待测样品液中制品的毫克数在本实验中，1mL待测液中制品量为50μg。1.紫外分光光度计使用前要预热。2.比色皿应成套使用，注意保护,不能拿在光面上。3.离心机使用前必须将离心管平衡，对称放置。调速必须从低到高，离心完等转子完全停下后，再打开盖子，然后将转速打到最低。注意事项*
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