疫学技术在科研中的应用.ppt

天疱疮免疫荧光染色用放射性同位素标记抗原或抗体进行的免疫测定。既有同位素的敏感性又有抗原抗体结合的特异性，同时具有重复性好、准确性高、标本用量少等优点。广泛应用于激素、药物等微量物质的检测。放射免疫测定法氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下，产生分散状态的胶体金颗粒。碱性条件下，金颗粒表面带负电荷，与蛋白质正电荷基团结合。不同还原剂作用于氯金酸，产生的胶体金粒径大小不相同(5—50nm)，小粒径的胶体金由于穿透性好，电子密度高，常被用于免疫电镜技术。这些小粒径的金颗粒，经银显影液处理后，金粒子还原银离子生成银颗粒而吸附在金颗粒周围呈黑褐色，从而放大了金颗粒的显色效果，又称免疫金银法。胶体金可标记白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。大分子以单层形式吸附在金颗粒表面。胶体金颜色随颗粒大小而变化，大于20nm的金颗粒在光镜下呈现砖红色，可在光镜水平行免疫分析，也可用银显影剂增强，进一步提高灵敏度。当胶体金的粒径较大、浓度密集时肉眼水平即可观察，即胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验。免疫胶体金技术12磁珠分离法fluorescence-activatedcellsorter，FACS免疫细胞的分离T细胞B细胞免疫细胞功能的测定免疫细胞的检测1特异性分离所需淋巴细胞的方法。2将特异性抗体(如抗CD3、抗CD4、抗CD8等)吸附在铁颗粒(磁珠)上，加至细胞悬液中，具有相应抗原的细胞与磁珠上的特异性抗体结合。3反应管置于磁场中，铁颗粒受磁场的吸引，携带有相应细胞的磁球吸附于靠近磁铁的管壁上。4弃细胞悬液，重新解离细胞与磁珠。磁珠分离法fluorescence-activatedcellsorter，FACS0102030405使用酶、免疫荧光标记单抗进行鉴定淋巴细胞转化试验E花环形成试验混合淋巴细胞培养CTL介导的细胞毒试验T细胞鉴定及功能测定抗原肽—MHC分子四聚体技术tetramer用生物素化的抗原肽—MHC分子复合物与荧光标记的亲合素结合，由于1个荧光素标记的亲合素可结合4个生物素分子，能使4个MHC／抗原肽复合物形成一个复合体，将该复合体标记荧光素后，即成抗原特异性四聚体。抗原特异性四聚体能与样品中的特异性T细胞的TCR结合，由于四聚体能同时结合一个T细胞表面的4个TCR，亲和力大大提高。用流式细胞术即可确定待检标本中抗原特异性CTL细胞的频率。MHC分子可为工类或Ⅱ类分子，与抗原肽形成的四聚体复合物，可分别鉴定表达特异性TCR的CD8+T细胞及CD4+T细胞的频率。ADBC测定B细胞产生抗体的能力溶血空斑试验ELISPOT检测B细胞分化抗原B细胞的鉴定及功能测定生物活性检测细胞增生或增生抑制法细胞病变抑制法趋化作用测定法免疫学检测法分子生物学技术细胞因子的检测基因敲除技术和转基因动物应用基因同源重组，将外源有功能基因(基因组中原先不存在、或已失活的基因)，转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插人到基因组中，在细胞内获得表达。通过同源重组产生目标基因缺失或失活的转基因动物可以确定被敲除的基因在体内代谢过程中的作用，还可确定被敲除基因在分化、发育、生存等过程中的作用和必要性。转基因动物可以作为疾病模型。可以用于药物筛选的动物模型。转基因动物可作为“生物反应器”生产药物。0102Th细胞在mCTL介导的肿瘤保护中作用的研究免疫新技术在科研中的应用需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎01fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台02需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入03相关帮助抗原或抗体的检测抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的影响因素常用的抗原抗体反应抗原抗体反应的特点高度的特异性可逆性抗原抗体结合除了空间构象互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的化学基团之间的非共价方式结合。这种非共价键不如共价键结合稳定，极易受温度、酸碱度和离子强度的影响而解离。抗原抗体比例影响免疫复合物的大小抗原抗体反应的两个阶段抗原抗体浓度与比例电解质抗原抗体特异性结合后，亲水性降低，易受电解质的影响而使表面失去较多的负电荷。温度适当的温度可增