课件禽病学（完整版）禽病学实验指导.ppt

;;实验一新城疫血凝与血凝抑制试验;;〔一〕血凝试验〔HA〕：取96孔板，按以下步

骤操作：

1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12

孔加生理盐水50ul为红细胞对照；

2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul

至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各

孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。;3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细

胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。

4、室温静置10-30分，观察结果。

5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。

;血凝试验流程图;〔二〕血凝抑制试验〔HAI〕：取一96孔板，按以下步骤操作：

1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。

2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中参加50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔……，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212。;3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀；

4、室温静置20min；

5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。

6、室温静置10-30分，观察结果；;7、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价，用2n表示。

;血凝抑制试验流程;;;;;〔3〕接种病毒：用18mm针头的1ml注射器吸

取鸡新城疫病毒，针头通过打出的孔进针，刺入尿囊腔，注入0.1ml。

〔4〕用融化的石蜡封闭小孔，39℃孵化器中

孵化72h。;;实验三鸡白痢平板凝集试验;;;5.静置3-4分，再拿起玻板轻轻转动，按以下标准记反响结果：

++++：出现大片凝集，液体完全透明，即100%凝集

+++：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即75%凝集

++：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集

+：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即25%凝集

-：液体均匀混浊，无凝集现象

〔同时应设阳性、阴性血清及抗原对照〕

6.结果判定：;实验四鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试验;器材及试剂:

生理盐水、琼脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液器、吸头等。

实验步骤:

1、制板:加融化的1%琼脂于洁净玻片或培养皿内，厚。

2、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔径3-4mm，孔距4-5mm。

3、加样：于中央孔参加标准沉淀抗原，周围1、4孔内加阳性血清对照，2、3、5、6孔为待检血清。;4、加样完后，将琼脂板置于湿盒中，37℃扩散24-48h。

5、结果判定：假设待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线，那么表示阳性，假设不出现沉淀线，为阴性。

假设用于检测血清效价，那么以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示〔2n〕。

用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。;;制板;实验五禽霍乱的诊断;器材及试剂:

病料：患病鸭组织〔肝、脾、肺〕或体液

〔血、胸腹腔渗出液〕；

培养基：5-10%兔血琼脂平板；

动物：小白鼠或成年健康家兔；

无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精

灯等。;实验步骤:

〔一〕形态学检查：病料或心血涂片，瑞氏染色。

〔二〕培养特性检查：将病料接种于血琼脂平板37℃培养24h。

〔三〕生化鉴定：;鸭霍乱心血涂片中的多杀性巴氏杆菌;〔四〕动物回归实验：将病料剪碎并研磨，用灭菌生理盐水制成1:10悬液，也可将血琼脂平板培养物制成悬液，皮下注射小白鼠，只。注意观察小鼠的表现，待发病死亡后，即行解剖，观察小鼠病变，用肝、脾触片或心血涂片，瑞氏染色镜检，应有两极浓染的球杆菌。同时上述病料接种血琼脂平板，次日观察细菌生长情况和菌落特征。;临床病症