汾酒酒糟醇提物抗结肠癌及其分子机制研究.pdf

中文摘要

结肠癌（Colorectalcancer，CRC）是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病率与死

亡率不断上升，对人类生命健康构成严重威胁。目前，化疗药物联合使用已提高了结

肠癌患者的生存率，但化疗药物耐药性的产生以及临床上的不良反应限制了其治疗

效果，因此开发新型有效的结肠癌治疗药物仍是临床的迫切需要。近年来的研究揭

示，酒糟中含有丰富的生理活性成分，然而研究多围绕其抗氧化、抗炎、抗菌等性能

开展，关于酒糟抗肿瘤作用及其活性成分鲜有报道。

本研究以汾酒酒糟为原材料，采用超声辅助乙醇提取得到酒糟醇提物DGAE，

在细胞水平评价其抗结肠癌效应。随后通过AB-8、SP207大孔树脂进一步分离纯化

得到具有显著抗结肠癌效应的活性组分，命名为DGAE-1。进一步在体外和体内研究

DGAE-1抗结肠癌效应及其分子机制。研究结果如下：

（1）DGAE在细胞水平具有显著抗结肠癌活性。MTT实验表明DGAE对人结

肠癌细胞株HT-29、SW620的IC50值分别为32.820µg/mL和48.795µg/mL；流式细

胞仪检测显示：DGAE能够诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。通过大孔树脂

分离纯化进一步得到抗结肠癌活性组分DGAE-1，MTT结果显示：DGAE-1对结肠

癌细胞生长有明显抑制作用，而对正常结肠上皮细胞FHC无明显毒性。

（2）DGAE-1通过抑制PI3K/AKT通路促进结肠癌细胞的自噬。通过Western

blot和mCherry-LC3B质粒转染实验，对人结肠癌细胞株HT-29、SW620的自噬水平

进行检测。经过DGAE-1处理后，细胞自噬水平显著提高，而自噬抑制剂3-MA可

阻断DGAE-1引起的细胞自噬，这说明DGAE-1通过自噬作用抑制结肠癌细胞增殖。

DGAE-1可抑制自噬相关信号通路PI3K及其下游蛋白AKT的磷酸化，且这种抑制

作用可被通路激活剂740Y-P逆转。表明DGAE-1通过下调PI3K/AKT信号通路诱导

细胞自噬进而抑制结肠癌细胞增殖。

（3）DGAE-1对裸鼠异种移植瘤的抑制效应。采用HT-29细胞构建裸鼠异种移

植瘤模型，评估DGAE-1对荷瘤小鼠的影响。结果显示，DGAE-1处理抑制裸鼠肿瘤

的生长，且能够达到与化疗药物5-FU相似的效果。此外，DGAE-1处理对裸鼠的体

重以及行为没有影响，脏器HE染色结果表明DGAE-1无病理毒性。DGAE-1促进

裸鼠肿瘤组织中自噬的发生，且与PI3K/AKT信号通路的抑制相关。以上结果表明：

DGAE-1通过抑制PI3K/AKT信号通路触发自噬进程，进而抑制结肠癌。

I

综上所述，本研究采用超声辅助乙醇提取法，从酒糟中提取出具抗结肠癌效应的

组分DGAE，并通过大孔树脂分离得到活性组分DGAE-1，其在体内和体外均具有显

著抗结肠癌活性。机制研究结果表明，DGAE-1通过调控PI3K/AKT通路介导的自

噬，抑制结肠癌的发展。本研究为抗结肠癌药物筛选或营养干预产品研发方面提供了

新的思路，同时为汾酒酒糟赋予了新的开发和利用价值。

关键词：结肠癌；汾酒酒糟；分离纯化；自噬；PI3K/AKT

II

ABSTRACT

Colorectalcancer(CRC)isacommonmalignanttumorofthegastrointestinaltract,

anditsmorbidityandmortalityareincreasing,seriouslythreateninghumanlifeandhealth.

Currently,theuseofchemotherapyincombinationwithdrugshasimprovedthesurvival

rateofcolorectalcancerpatients,butdrugresistanceandclinicaladversereactionslimitits

therapeutice