DB37T 1826-2011 猪圆环病毒2型环介导等温扩增技术.pdfVIP

ICS65.020.30

B43

DB37

山东省地方标准

DB37/T1826—2011

猪圆环病毒2型环介导等温扩增技术

Loop-mediatedisothermalamplificationforporcinecircovirustype2

2011-04-08发布2011-06-01实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/TXXXX—XXXX

前言

本标准的编制依据GB/T1.1-2009的规定。

本标准由山东省农业科学院提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所；青岛农业大学。

本标准主要起草人：王金宝、李俊、吴家强、韩偲、时建立、周顺、丛晓燕、徐绍建、孙文博、杜

以军。

I

DB37/TXXXX—XXXX

猪圆环病毒2型环介导等温扩增技术

1范围

本标准规定了猪圆环病毒2型（PCV2）的环介导等温扩增（LAMP）检测技术的要求。

本标准适用于猪血清和组织中猪圆环病毒2型的检测。

2材料

2.1器材

2.1.1微量移液器（最大量程为10μL、20μL、100μL、1000μL）

2.1.220000g低温离心机

2.1.3电热恒温水槽

2.1.4稳流稳压电泳仪

2.1.5水平电泳槽

2.1.6凝胶成像系统

2.2紫外透射反射分析仪试剂

2.2.1蛋白酶K溶液（20mg/mL）：配制见附录A.1章

2.2.210%十二烷基硫酸钠（SDS溶液，pH7.2）：配制见附录A.2章

2.2.3Tris平衡酚

2.2.4三氯甲烷

2.2.5无水乙醇

2.2.670%乙醇：配制见附录A.3章。

2.2.75mol/LBetaine溶液：配制见附录A.4章

2.2.8100mmol/LMgSO4溶液：配制见附录A.5章

2.2.9BstDNAPolymerase（8U/μL）

2.2.10SYBRGreenⅠ核酸染料

2.2.110.5×TBE缓冲液：配制见附录A.6章。

2.2.12电泳级1%琼脂糖：配制见附录A.7章。

2.2.1310mg/mL的溴化乙锭（EB）水溶液。

2.2.14DNAMarker2000

2.3引物

F3：5’-CTCCAGTGCTGTTATTCTAGATGA-3’

B3：5’-TTTCCAGCAGTTTGTAGTCTCA-3’

FIP：5’-GAAGGGCTGGGTTATGGTATGGC-TTTT-ACAGCCCTCACCTATGACC-3’

BIP：5’-CCGCTACTTTACCCCCAAACCT-TTTT-GCCACAGCTGATTTCTTTTGTTG-3’

1

DB37/TXXXX—XXXX

3方法

3.1病料处理

将病料剪碎放于灭菌的研磨器中磨碎，用生理盐水1∶5倍稀释，取悬液反复冻融3次，5000g离心

15min，取上清液-20℃保存备用。

3.2病毒DNA的提取

3.2.1取上清